農(nóng)桿菌介導(dǎo)的HAL1基因轉(zhuǎn)化紫花苜蓿的研究.pdf

1、土壤鹽漬化是一個(gè)世界性問(wèn)題，是影響農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和生態(tài)環(huán)境的一個(gè)重要的非生物脅迫因素。如何提高作物耐鹽性，使其在鹽堿地上正常生長(zhǎng)，是有效利用鹽堿地的途徑之一。 苜蓿是我國(guó)西部主要的牧草作物，有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，對(duì)苜蓿進(jìn)行特異性改良，對(duì)于有效利用鹽漬化土壤，發(fā)展優(yōu)質(zhì)牧草生產(chǎn)上有重要意義。 本試驗(yàn)進(jìn)行了苜蓿品種高頻再生體系建立及抗鹽基因HALI轉(zhuǎn)化研究。獲得了以下研究結(jié)果： 1.研究了不同預(yù)處理方法對(duì)4種紫花苜蓿再生性能的影

2、響，表明：預(yù)處理方法對(duì)4種紫花苜蓿品種間的影響未達(dá)到顯著水平(P>0.05)，處理II對(duì)4種紫花苜蓿的分化率的影響較處理Ⅰ和Ⅲ達(dá)到顯著水平(P<0.05)，因此，紫花苜蓿種子在4℃條件下浸泡2h的效果最好。 2.篩選出2種紫花苜蓿下胚軸最佳愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+2,4-D1.0mg/L+6-BA2.0mg/L+0.55％瓊脂+30g/L蔗糖和MS+2,4-D2.0mg/L+6-BA 2.0mg/L+0.55％瓊脂+30g/L

3、蔗糖。1種最佳愈傷組織分化培養(yǎng)基：MS+6-BA 0.3mg/L+KT3.0mg/L+NAA 0.1mg/L+0.55％瓊脂+50g/L蔗糖。 3.研究表明：不同基因型紫花苜蓿愈傷組織誘導(dǎo)率差異不大，但分化特性差異顯著，4個(gè)供試基因型紫花苜蓿分化頻率高低依次為北極星(40.2％)、阿爾剛金(37.5％)、皇后2000(35.7％)和國(guó)產(chǎn)紫花(21.1％)。蔗糖是影響紫花苜蓿下胚軸愈傷組織分化的重要因素，蔗糖質(zhì)量濃度為50g/L時(shí)

4、有利于紫花苜蓿下胚軸愈傷組織的分化。 4.以紫花苜蓿北極星品種的下胚軸為外植體，建立并優(yōu)化了紫花苜蓿抗性選擇體系。 60mg/LKan作為誘導(dǎo)愈傷組織和愈傷組織分化時(shí)的篩選濃度，30mg/LKan為轉(zhuǎn)化植株生根時(shí)的篩選濃度。 5.優(yōu)化了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的HAL1基因轉(zhuǎn)化紫花苜蓿的遺傳轉(zhuǎn)化體系：經(jīng)4℃條件下浸泡2h紫花苜蓿品種北極星，預(yù)培養(yǎng)2d后，將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期(OD600)攜帶目的基因HAL1的農(nóng)桿菌LBA4404稀釋200