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文檔簡介
1、柑橘是世界上最重要的水果之一,其面積和產(chǎn)量在所有水果種類中均居第一位,在人們?nèi)粘I钪姓加兄匾牡匚弧5歉涕佼a(chǎn)業(yè)中還存在著很多問題,如病蟲害及自然災(zāi)害危害嚴(yán)重,成熟期過于集中,品種結(jié)構(gòu)不合理等。全世界大約有20%可耕土地及一半以上的水澆田受鹽漬化影響,并且這種影響在日益加劇,我國也大約有5億畝鹽漬化土地。因為柑橘上存在童期長、多胚性和珠心胚現(xiàn)象、遺傳的高度雜合及單性結(jié)實等特點,利用常規(guī)育種方法進(jìn)行抗鹽品種改良受到限制,影響了育種工作的
2、進(jìn)行。農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因方法的突破,以及各類植物抗逆相關(guān)基因的克隆,為柑橘抗逆基因工程奠定了基礎(chǔ)。 本研究以優(yōu)良柑橘甜橙品種的愈傷組織和上胚軸為外植體,利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化MdSPDS1和HAL2基因,期望能夠獲得抗鹽的新種質(zhì)。主要研究結(jié)果如下: 1.研究卡那霉素對朋娜臍橙和佛羅斯特臍橙胚性愈傷組織的影響。確定了在柑橘轉(zhuǎn)化實驗中,篩選抗性愈傷組織的適宜卡那霉素濃度為50 mg/L。 2.對椪柑和錦橙的上胚軸再
3、生體系進(jìn)行了初步研究。結(jié)果表明:BA對上胚軸再生影響最大,當(dāng)BA濃度為1.0 mg/L時,再生頻率最高;椪柑上胚軸水平和垂直放置時最適宜的再生培養(yǎng)基分別為:MT+1.0 mg/L BA+0.5 mg/L IAA和MT+1.0 mg/LBA+1.0 mg/L IAA;錦橙上胚軸水平放置時最適宜的再生培養(yǎng)基為:MT+1.0 mg/LBA+0.5 mg/L IAA。 3.對影響朋娜臍橙愈傷組織轉(zhuǎn)化效率的有關(guān)因子進(jìn)行了初步優(yōu)化,實驗表明
4、:當(dāng)侵染時間為15-20 min、侵染濃度OD<,600>值為0.8、共培養(yǎng)天數(shù)為3 d時,轉(zhuǎn)化效率最高。 4.MdSPDS1基因和HAL2基因轉(zhuǎn)化朋娜臍橙獲得抗性愈傷組織,經(jīng)多次選擇繼代,生長正常,分別經(jīng)nptⅡ和35S-MdSPDS1、nptⅡ和HAL2引物PCR擴(kuò)增分析鑒定證實為轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物。 5.將得到的MdSPDS1基因轉(zhuǎn)化朋娜臍橙的轉(zhuǎn)基因系進(jìn)行鹽脅迫(100mM),結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因系愈傷的鮮重增殖比對照要高,電導(dǎo)
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