骨組織修復(fù)相關(guān)細胞在電紡絲膜上的生物學(xué)行為研究.pdf

1、人們投入巨大的努力來制造各種生物材料來滿足某些特殊的臨床需要。本研究中，我們將聚左旋乳酸(poly(L-lactic acid)，PLLA)、多壁碳納米管(multiwalled carbon nanotubes，MWNTs)和羥基磷灰石(hydroxyapatite，HA)混懸液通過電紡工藝制造出一種新型的引導(dǎo)性組織再生膜和組織工程支架材料。
　　 MWNTs/HA納米顆粒在膜中分布均勻，膜的降解性能得到了很大的改善。細胞學(xué)實

2、驗證實，與對照組PLLA膜相比，在PLLA/MWNTs/HA膜上，牙周膜細胞(periodontal ligament cells，PDLCs)粘附和增殖增加了30％，而牙齦上皮細胞(gingival epithelialcells，GEC)則減少了30％。將PDLCs接種于PLLA/MWNTs/HA膜上，并將二者的復(fù)合體植入裸鼠腿部的肌袋中。組織學(xué)檢查結(jié)果顯示貼附在膜上的PDLCs在體內(nèi)功能良好。這種新型膜材料雖然只是單層結(jié)構(gòu)，但是卻

3、表現(xiàn)出良好的雙重生物學(xué)功能，能夠很好的滿足引導(dǎo)性組織再生術(shù)的要求。與市場上正在出售的GTR膜或正在研究的GTR膜相比，這種膜可以簡化生產(chǎn)步驟，降低生產(chǎn)費用并避免了臨床應(yīng)用過程中可能出現(xiàn)的錯誤。而且，這種膜在術(shù)后不需要去除。PLLA/MWNTs/HA膜在GTR和組織工程方面擁有巨大的應(yīng)用潛力。
　　 本研究初步探索人羊膜基質(zhì)細胞(human amniotic mesenchymal cells，hAMC)作為骨組織工程種子細胞的潛

4、力。對人羊膜基質(zhì)細胞進行分離培養(yǎng)，將第3代PDLCs在含有地塞米松(0.1μmol/L)、維生素C(50 mg/L)和β-磷酸甘油鈉(10 mmol/L)的DMEM培養(yǎng)液進行成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)1周，進行茜素紅染色，計數(shù)鈣化結(jié)節(jié)形成數(shù)量，并進行免疫熒光細胞化學(xué)染色以檢測Ⅰ型膠原和堿性磷酸酶的表達。利用免疫組織(細胞)化學(xué)染色檢測羊膜及hAMC中FasL的表達。結(jié)果顯示人羊膜基質(zhì)細胞經(jīng)過成骨誘導(dǎo)后，可見明顯鈣化結(jié)節(jié)形成，平均每孔18個。鈣化結(jié)節(jié)處

5、細胞Ⅰ型膠原和堿性磷酸酶表達陽性。人羊膜組織中細胞及體外培養(yǎng)的hAMC均可檢測到FasL的陽性表達。這提示人羊膜基質(zhì)細胞有潛力成為一種較為理想的骨組織工程的種子細胞。
　　 本研究探索了人羊膜基質(zhì)細胞和電紡聚乳酸/羥基磷灰石(Poly(L-lactic acid)/hydroxyapatite，PLLA/HA)膜構(gòu)建骨組織工程細胞/支架復(fù)合體。分離培養(yǎng)羊膜基質(zhì)細胞，利用MTT法檢測PLLA和PLLA/HA膜浸提液對羊膜基質(zhì)細胞增

6、殖的影響；將第3代羊膜基質(zhì)細胞與PLLA和PLLA/HA膜在成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液中復(fù)合培養(yǎng)，在第1周和第4周時進行組織學(xué)檢查，并在第4周時進行免疫熒光細胞化學(xué)染色以檢測Ⅰ型膠原和堿性磷酸酶的表達。結(jié)果顯示PLLA和PLLA/HA膜浸提液對羊膜基質(zhì)細胞均無明顯細胞毒性。羊膜基質(zhì)細胞與兩種膜材料復(fù)合培養(yǎng)后，細胞增殖明顯，而且可以觀察到鈣化結(jié)節(jié)的形成，鈣化結(jié)節(jié)處細胞Ⅰ型膠原和堿性磷酸酶表達陽性。這表明人羊膜基質(zhì)細胞與電紡聚乳酸/羥基磷灰石膜可以共同