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1、研究目的: 1.探討人尿液中透明質(zhì)酸濃度升高與膀胱移行細(xì)胞癌的關(guān)系,探索尿透明質(zhì)酸含量檢測(cè)在膀胱移行細(xì)胞癌診斷中的可能意義; 2.研究人膀胱移行細(xì)胞癌組織中透明質(zhì)酸的表達(dá)情況,求證患者尿液中透明質(zhì)酸濃度升高的可能原因; 3.探索人膀胱移行細(xì)胞癌組織中透明質(zhì)酸合成增加的可能原因,推測(cè)透明質(zhì)酸與膀胱移行細(xì)胞癌生物學(xué)行為的關(guān)系; 4.研究人為阻斷膀胱移行細(xì)胞癌組織中透明質(zhì)酸的大量合成的方法及其效果,為人膀胱移行
2、細(xì)胞癌的相應(yīng)的基因治療奠定基礎(chǔ)。 研究方法: 1.分別應(yīng)用放射免疫測(cè)定法和ELISA方法對(duì)不同級(jí)別的膀胱移行細(xì)胞癌患者、泌尿系非腫瘤性疾病患者和正常人尿液中的透明質(zhì)酸進(jìn)行檢測(cè),并與患者的病理結(jié)果、臨床資料進(jìn)行對(duì)比性研究; 2.應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方法對(duì)不同級(jí)別的人膀胱移行細(xì)胞癌、正常膀胱黏膜組織切片中透明質(zhì)酸的表達(dá)情況進(jìn)行研究; 3.原代培養(yǎng)膀胱移行細(xì)胞癌組織中成纖維細(xì)胞,成功鑒定后穩(wěn)定傳代; 4
3、.應(yīng)用半定量RT-PCR方法對(duì)人膀胱移行細(xì)胞癌組織、正常膀胱黏膜組織中成纖維細(xì)胞內(nèi)透明質(zhì)酸合成酶各亞型的表達(dá)情況進(jìn)行研究,確定其優(yōu)勢(shì)表達(dá)亞型; 5.應(yīng)用RNA干擾技術(shù)阻斷人膀胱移行細(xì)胞癌組織中成纖維細(xì)胞內(nèi)透明質(zhì)酸合成酶優(yōu)勢(shì)亞型的表達(dá),了解該方法抑制細(xì)胞透明質(zhì)酸合成的效果。 研究結(jié)果: 1.膀胱移行細(xì)胞癌患者尿液中透明質(zhì)酸含量較正常人、其他泌尿系疾病患者明顯升高,且隨患者腫瘤病理分級(jí)、臨床分期的升高而升高;
4、 2.人膀胱移行細(xì)胞癌組織中透明質(zhì)酸的表達(dá)較正常膀胱黏膜組織明顯顯著,腫瘤的級(jí)別越高,透明質(zhì)酸表達(dá)似越明顯;大部分染色位于腫瘤細(xì)胞外基質(zhì); 3.成功進(jìn)行了人膀胱移行細(xì)胞癌組織中成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)和鑒定工作; 4.人膀胱移行細(xì)胞癌組織中成纖維細(xì)胞內(nèi)有透明質(zhì)酸合成酶1、3亞型的表達(dá),尤以后者的表達(dá)為明顯,而人正常膀胱黏膜組織中成纖維細(xì)胞中僅有少量透明質(zhì)酸合成酶1的表達(dá); 5.RNA干擾技術(shù)使人膀胱移行細(xì)胞癌組織中成
5、纖維細(xì)胞內(nèi)的透明質(zhì)酸合成酶3的表達(dá)減少了78.2%,透明質(zhì)酸的合成減少了60.3%。 研究結(jié)論: 1.患者尿液中透明質(zhì)酸濃度升高與膀胱移行細(xì)胞癌的關(guān)系密切,透明質(zhì)酸似可作為膀胱移行細(xì)胞癌的尿源性標(biāo)記物之一; 2.人膀胱移行細(xì)胞癌組織中透明質(zhì)酸大量出現(xiàn),與腫瘤惡性程度似呈正相關(guān);膀胱移行細(xì)胞癌患者尿液中透明質(zhì)酸絕大部分來源于腫瘤組織; 3.人膀胱移行細(xì)胞癌組織中透明質(zhì)酸很大一部分是由于腫瘤基質(zhì)中成纖維細(xì)胞的
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