依達拉奉對骨骼肌缺血再灌注損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、目的:缺血組織恢復(fù)血供后組織損傷進一步加重的現(xiàn)象即缺血再灌注損傷。肢體創(chuàng)傷修復(fù)、游離組織移植、斷肢再植等都遭受缺血再灌注損傷,造成骨骼肌功能障礙。自由基在組織缺血再灌注過程中具有重要作用,依達拉奉是日本厚生省于2001年批準上市的新型強效自由基清除劑,本實驗建立兔后肢缺血再灌注模型,肢體恢復(fù)血供前給予依達拉奉,觀察其對后肢骨骼肌缺血再灌注損傷的保護作用。
　　 方法:選取健康成年新西蘭大耳白兔30只,雌雄不限,體重2～2.5kg

2、,隨機分為實驗組、對照組、假手術(shù)組,每組10只。實驗動物麻醉平穩(wěn)后取仰臥位,沿股神經(jīng)、血管走行方向切開皮膚,顯露股動靜脈,然后無創(chuàng)血管夾夾閉股動靜脈阻斷血流,并用止血帶于股鞘下環(huán)扎肢體阻斷側(cè)支循環(huán)維持缺血3h,實驗組動物于再灌注前30min經(jīng)耳緣靜脈輸注1.5m1./kg依達拉奉注射液；對照組相同方法制作缺血模型,于再灌注前30min輸注30ml生理鹽水；假手術(shù)組顯露股動靜脈不阻斷血流,曠置6小時后取材。實驗組和對照組恢復(fù)肢體血液循環(huán)3

3、h后取材。抽取左側(cè)股靜脈血2ml,4℃,2500r/min條件下離心15min,提取血清利用全自動生化分析儀測定肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)含量,放射免疫法測定ET含量,硝酸還原酶法550nm波長處測定血清NO的含量,取脛前肌組織0.1g,按1:9的質(zhì)量體積比加入冷生理鹽水中,制成10％的勻漿液,低溫(4℃)下1000rpm/min離心30min,取上清液硫代巴比妥酸法532nm處分光光度計測算丙二醛(MDA)含量,黃嘌呤氧化

4、酶法270nm處測算髓過氧化物酶(MPO)含量,550nm波長處測定肌肉勻漿中超氧化物歧化酶(SOD)活性,取0.5g脛前肌測量濕干比,光鏡觀察脛前肌組織細微結(jié)構(gòu)改變。
　　 結(jié)果:實驗組SOD活性(173.98±12.91)U/g大于對照組(87.71±4.46)U/g(P＜0.05),小于空白組(208.51±10.74)U/g(P＜0.05)；實驗組MDA、MPO含量、W/D值(42.81±4.11)μmol/g,(4.2

5、8±0.57)U/g,(4.67±0.65)低于對照組(74.09±6.21)μmol/g,(8.54±0.74)U/g,(6.09±0.56)(P＜0.05),實驗組MDA、MPO含量高于假手術(shù)組(29.73±4.17)μmol/g,(1.66±0.49)U/g(P＜0.05),實驗組與假手術(shù)組W/D值無差異(P=0.386＞0.05),以上指標在對照組與假手術(shù)組之間比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。實驗組NO含量(117.22±10

6、.67)μmol/L大于對照組(66.23±6.40)μmol/L(P＜0.05),與空白組比較無差異(P=0.186＞0.05):實驗組CK、LDH含量(5640±641)U/L,(489.2±44.9)U/L低于對照組(7930±623)U/L(593.0±35.9)U/L(P＜0.05),高于假手術(shù)組(1985±347)U/L(265.5±23.7)U/L(P＜0.05),以上指標在對照組與假手術(shù)組之間比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.0

7、5),ET-1含量在三組間無差異(P＞0.05)。光鏡結(jié)果顯示對照組肌纖維腫脹,部分斷裂,較多肌細胞橫紋模糊不清,間質(zhì)明顯水腫,炎性細胞滿視野浸潤；實驗組肌纖維基本正常,間質(zhì)輕度水腫,少見或偶見炎性細胞浸潤；假手術(shù)組肌纖維呈幾乎正常的組織學(xué)改變。
　　 結(jié)論:再灌注早期給予強效的自由基清除劑依達拉奉可以保護骨骼肌缺血再灌注損傷,通過清除或抑制自由基的產(chǎn)生,減輕自由基引起的生物膜結(jié)構(gòu)脂質(zhì)過氧化、微循環(huán)內(nèi)皮功能障礙導(dǎo)致的無復(fù)流現(xiàn)象,