利用SSR標(biāo)記技術(shù)對(duì)白樺長(zhǎng)纖維性狀的研究.pdf

1、白樺(Betulaplatyphylla)為我國(guó)東北與內(nèi)蒙古林區(qū)的先鋒樹(shù)種，是非常優(yōu)良的短周期闊葉紙漿用材樹(shù)種。纖維長(zhǎng)度是影響紙張品質(zhì)的主要因素之一，為了加速長(zhǎng)纖維白樺紙漿材新品種選育進(jìn)程，本文進(jìn)行了以下研究： 1、通過(guò)測(cè)定和分析帽兒山實(shí)驗(yàn)林場(chǎng)583株白樺和哈爾濱林場(chǎng)200株白樺纖維長(zhǎng)度的分布特點(diǎn)，不僅說(shuō)明纖維長(zhǎng)度性狀是典型數(shù)量性狀、適合采用分子標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行研究，而且分別從中選擇出能代表這2個(gè)群體的100株個(gè)體組成分析群體用于長(zhǎng)

2、纖維性狀分子標(biāo)記分析、40株驗(yàn)證群體用于長(zhǎng)纖維標(biāo)記的驗(yàn)證。 2、通過(guò)正交設(shè)計(jì)方法確定了SSR反應(yīng)體系，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行了驗(yàn)證。在正交設(shè)計(jì)的基礎(chǔ)上，得出了白樺SSR最佳反應(yīng)體系。20μL反應(yīng)體系包括：DNA100ng，Mg<'+2>3mmol/L Taq酶0.5U，dNTP 0.5 mmol/L，引物濃度為0.4μmol/L；循環(huán)參數(shù)為：94℃預(yù)變性5min后，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)94℃變性30s，59.5℃復(fù)性30s，72℃延伸30s；7

3、2℃延伸5min，4℃保存。 3、利用生物信息學(xué)方法，分析了NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)的2 548條歐洲白樺(Betula pendula)EST序列，結(jié)果表明：其中共有260條EST序列含有307個(gè)SSR，占全部 EST的10.20％，SSR的出現(xiàn)頻率是12.05％。利用SSR Primer和Primer3軟件對(duì)發(fā)現(xiàn)的260個(gè)含有SSR序列的EST序列進(jìn)行東北白樺SSR引物設(shè)計(jì)，結(jié)果表明：在Primer3設(shè)計(jì)出的176對(duì)引物，共有104對(duì)

4、引物產(chǎn)生擴(kuò)增現(xiàn)象，占合成引物的59.09％，其中27對(duì)引物具有多態(tài)性，僅占25.96％；在SSR Primer設(shè)計(jì)的100對(duì)引物，有37對(duì)引物產(chǎn)生了擴(kuò)增產(chǎn)物，占合成引物的37.00％，其中只有18對(duì)引物的擴(kuò)增具有多態(tài)性。 4、通過(guò)纖維長(zhǎng)度與SSR標(biāo)記的多元回歸分析，得到了4條與白樺纖維長(zhǎng)度呈顯著相關(guān)SSR片段擴(kuò)增條帶。利用與這4條片段對(duì)應(yīng)的SSR引物對(duì)驗(yàn)證群體進(jìn)行擴(kuò)增結(jié)果表明，4對(duì)長(zhǎng)纖維性狀SSR引物對(duì)長(zhǎng)纖維白樺的鑒定率平均為6