TRAIL基因多態(tài)性與中國(guó)山東漢族人慢性乙型肝炎的相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分TRAIL基因多態(tài)性與中國(guó)山東漢族人慢性乙型肝炎的相關(guān)性研究 背景： 乙型肝炎是由乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV）感染引起的肝臟炎癥性病變，是我國(guó)當(dāng)前流行最廣、危害最嚴(yán)重的一種傳染病，其中約5％-10％感染者可轉(zhuǎn)為慢性，遷延數(shù)年，反復(fù)活動(dòng)，甚至轉(zhuǎn)變?yōu)楦斡不蚋伟?。乙型肝炎慢性化與多種因素有關(guān)，包括年齡、免疫功能、飲酒、合并感染或藥物等。目前，凋亡因子在慢性乙型肝炎病變過(guò)程中的作用已引起許多學(xué)

2、者的關(guān)注。 腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand，TRAIL），是1995年由Wiley發(fā)現(xiàn)并命名的，人TRAIL基因定位于染色體3q26，由5個(gè)外顯子組成，編碼1.77 kb mRNA，并可編碼281個(gè)氨基酸殘基組成的分子量為32.5 KDa的Ⅱ型跨膜蛋白。TRAIL屬于TNF超家族成員，其結(jié)構(gòu)與該家族的其他成員相仿。TRA

3、IL可通過(guò)與其受體結(jié)合，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，或發(fā)揮其他生物學(xué)作用。近幾年通過(guò)臨床資料及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)TRAIL的表達(dá)水平與乙肝病毒在人體的感染呈現(xiàn)相關(guān)性，外周血sTRAIL的分泌能夠從一定程度上反映HBV感染后疾病的進(jìn)展及肝臟的損傷狀況，表明TRAIL參與乙型病毒性肝炎的致病過(guò)程，但TRAIL的多態(tài)性是否與慢性乙型肝炎的發(fā)生有關(guān)尚未見(jiàn)報(bào)道。 目的： 通過(guò)檢測(cè)慢性乙型肝炎和健康對(duì)照組人群TRAIL基因第五外顯子3’-非編碼區(qū)

4、（3’-untranslated region，3’-UTR）1525G/A、1595C/T位點(diǎn)基因單核苷酸多態(tài)性（SNPs），探討慢性乙型肝炎與TRAIL基因SNPs的關(guān)聯(lián)性。 方法： 采用病例對(duì)照的方法，收集確診的慢性乙型肝炎患者187例，同時(shí)選擇142例健康個(gè)體作為對(duì)照。全部選擇對(duì)象均空腹抽取靜脈血，通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性內(nèi)切酶片段長(zhǎng)度多態(tài)性（polymerase chain reaction-Restrict

5、ion fragment length polymorphism，PCR-RFLP）法檢測(cè)兩組人群TRAIL基因第五外顯子3’-非編碼區(qū)1525/1595兩位點(diǎn)基因多態(tài)性。 結(jié)果： 1.TRAIL等位基因1525G/A和1595C/T在病例組和對(duì)照組中的分布已達(dá)到遺傳平衡。病例組（x2=1.207，P=0.547）和對(duì)照組（x2=0.917，P=0.632）P值均大于0.05，無(wú)顯著性差異。 2.TRAIL基因1

6、525位點(diǎn)檢測(cè)到GG、GA、AA三種基因型，從1595位點(diǎn)檢測(cè)到CC、CT、TT三種基因型。并發(fā)現(xiàn)TRAIL基因1525位點(diǎn)的GG、GA、AA基因型分布分別與1595位點(diǎn)的CC、CT、TT基因型一一對(duì)應(yīng)。 3.正常對(duì)照組中，男性的TRAIL基因1525G/A和1595C/T位點(diǎn)三種基因型1525GG/1595CC、1525GA/1595CT、1525AA/1595TT的出現(xiàn)頻率分別為34.2％、41.0％、24.8％；女性出現(xiàn)頻

7、率分別為24.0％、60.0％、16.0％，TRAIL1525G/A和1595C/T位點(diǎn)SNPs在男性、女性中分布無(wú)顯著性差異（x2=3.016，P=0.221），說(shuō)明在正常個(gè)體中TRAIL基因1525及1595位點(diǎn)三種基因型分布無(wú)性別差異，該位點(diǎn)SNPs與性別無(wú)關(guān)。 4.慢性乙型肝炎組中，男性TRAIL基因1525G/A和1595C/T位點(diǎn)三種基因型1525GG/1595CC、1525GA/1595CT、1525AA/1595

8、TT的出現(xiàn)頻率分別為39.2％、51.0％、9.8％；女性出現(xiàn)頻率分別為14.7％、61.8％、23.5％，兩組比較有顯著性差異（x2=9.680，P=0.008），提示在慢性乙型肝炎患者中，1525G/A、1595C/T位點(diǎn)SNPs與性別有關(guān)，在女性中多表現(xiàn)為1525AA/1595TT純合，而在男性中多表現(xiàn)為1525GG/1595CC純合。 5.TRAIL1525G/A和1595C/位點(diǎn)三種基因型1525GG/1595CC、1

9、525GA/1595CT、1525AA/1595TT在對(duì)照組中出現(xiàn)頻率分別為32.4％、44.4％、23.2％；而慢性乙型肝炎組出現(xiàn)頻率分別為34.8％、52.9％、12.3％，兩組比較有顯著性差異（x2=7.014，P=0.03）。但等位基因1595C/1525G和1595T/1525A在對(duì)照組與病例組中的分布無(wú)顯著性差異（x2=2.940，P=0.086）。 6.慢性乙肝HBeAg陽(yáng)性患者TRAIL基因1525G/A和159

10、5C/T位點(diǎn)三種基因型1525GG/1595CC、1525GA/1595CT、1525AA/1595TT出現(xiàn)頻率分別為39.0％、50.5％、10.5％，與對(duì)照組比較有顯著性差異（x2=6.230，P=0.044）；而慢性乙肝HBeAg陰性患者出現(xiàn)頻率分別為24.2％、59.7％、16.1％，與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異（x2=4.070，P=0.131）。慢性乙肝HBeAg陽(yáng)性與陰性患者TRAIL基因1525G/A和1595C/T位點(diǎn)SN

11、Ps比較也無(wú)顯著性差異（x2=3.970，P=0.137）。 結(jié)論： 中國(guó)漢族人存在TRAIL基因1525G/A、1595C/T多態(tài)位點(diǎn)，且1525G/A、1595C/T位點(diǎn)SNPs情況完全一致。TRAIL基因1525G/A、1595C/T位點(diǎn)的SNPs在正常人群的分布無(wú)性別差異，而在慢性乙型肝炎患者中的分布存在性別差異。慢性乙肝HBeAg陽(yáng)性患者與正常人比較，TRAIL基因1525G/A、1595C/T位點(diǎn)SNPs有顯

12、著差異；而慢性乙肝HBeAg陰性患者與正常人比較，TRAIL基因1525G/A、1595C/T位點(diǎn)SNPs無(wú)顯著差異。TRAIL基因1525G/A、1595C/T位點(diǎn)SNPs在慢性乙型肝炎組與正常人群的分布有顯著差異，提示TRAIL SNPs與慢性乙型肝炎的易感性有關(guān)。 第二部分慢性乙型肝炎患者外周血中睪酮的變化及其意義 背景: 乙型肝炎是由乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV）感染引起的肝臟炎癥

13、性病變，是我國(guó)當(dāng)前流行最廣、危害最嚴(yán)重的一種傳染病，其中約5％-10％感染者可轉(zhuǎn)為慢性，遷延數(shù)年，反復(fù)活動(dòng)，甚至轉(zhuǎn)變?yōu)楦斡不蚋伟?。乙型肝炎慢性化與多種因素有關(guān)，包括年齡、免疫功能、飲酒、合并感染或藥物等。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，慢性乙型肝炎患者男性明顯多于女性，至于性激素是否在該病的發(fā)生中起一定作用，目前尚未見(jiàn)相關(guān)研究。在睪酮與肝癌的相關(guān)性研究中，發(fā)現(xiàn)HBsAg陽(yáng)性的肝癌患者其血清睪酮水平顯著高于HBsAg陰性患者，為進(jìn)一步明確血清睪酮水平與

14、慢性乙型肝炎發(fā)生的相關(guān)性，本文采用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)了65例慢性乙型肝炎患者及35例正常人血清中的睪酮水平，并進(jìn)一步檢測(cè)分析了睪酮與其他生化指標(biāo)的相關(guān)性，旨在探討血清雄激素睪酮在慢性乙型肝炎發(fā)生中的作用及其意義，為慢性乙型肝炎的預(yù)防、診斷及治療提供新的思路。 目的: 探討睪酮水平與慢性乙型肝炎發(fā)生的相關(guān)性。 方法: 用電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定65例慢性乙型肝炎患者和35例健康者血清睪酮水平，同時(shí)用臨床化學(xué)國(guó)際聯(lián)盟（

15、IFCC）推薦方法分別檢測(cè)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）以及γ-谷氨?；D(zhuǎn)肽酶（GGT），DCA終點(diǎn)法檢測(cè)血清總膽紅素（TBIL），AMP法檢測(cè)堿性磷酸酶（ALP），免疫比濁法檢測(cè)免疫球蛋白IgG、IgM、IgA，熒光定量PCR檢測(cè)外周血HBV DNA水平。 結(jié)果: 慢性乙型肝炎患者血清睪酮水平顯著高于正常對(duì)照組（P<0.01），尤其以20-40歲的慢性乙型肝炎患者血清睪酮升高最為明顯，HBe