外周血sTRAIL水平及TRAIL基因多態(tài)性與中國漢族人脂肪肝的相關(guān)性研究.pdf

1、背景：脂肪性肝病(fatty liver disease，F(xiàn)LD)簡稱脂肪肝，是一種由多種病因引起的、病變主要在肝小葉，以肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯異常儲(chǔ)積為主要表現(xiàn)的臨床病理綜合征，近年來，隨著人們生活飲食結(jié)構(gòu)的變化，F(xiàn)LD的發(fā)病率有進(jìn)一步增高的趨勢，有統(tǒng)計(jì)，在校正了年齡、性別和居住地區(qū)等因素后，脂肪肝、酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver disease，AFLD)和非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty l

2、iver disease，NAFLD)總的標(biāo)準(zhǔn)發(fā)病率為11.3％，2.2％和9.1％(成人為14.5％，2.9％和11.7％)，日趨超越病毒性肝炎，是導(dǎo)致肝臟相關(guān)性致殘和死亡的重要原因，已成為全球普遍關(guān)注的醫(yī)學(xué)問題和社會(huì)問題。脂肪肝的發(fā)病與多種因素有關(guān)，是多種因子相互作用的結(jié)果。目前，凋亡因子在肝脂肪變過程中的作用已引起許多學(xué)者的關(guān)注。 腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(tumor necrosis factor related a

3、poptosis inducing ligand，TRAIL)，是1995年由Wiley發(fā)現(xiàn)并命名的，人TRAIL基因定位于染色體3q26，由5個(gè)外顯子組成，編碼1.77 kb mRNA，并可編碼281個(gè)氨基酸殘基組成的分子量為32.5 KDa的Ⅱ型跨膜蛋白。TRAIL屬于TNF超家族成員，其結(jié)構(gòu)與該家族的其他成員相仿。TRAIL可通過與其受體結(jié)合，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，或發(fā)揮其他生物學(xué)作用。近幾年通過臨床資料及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)TRAIL的表

4、達(dá)水平與人外周血脂質(zhì)水平呈現(xiàn)相關(guān)性，并且TRAIL在病毒感染和攝入酒精后可誘導(dǎo)肝脂肪變，但TRAIL在肝脂肪變中的具體作用尚不明了。FLD的發(fā)病與多種凋亡相關(guān)因子的多態(tài)性有關(guān)，但TRAIL的多態(tài)性是否與FLD的發(fā)生有關(guān)尚未見報(bào)道。 目的：通過檢測人外周血TRAIL、轉(zhuǎn)氨酶、血糖、血脂等生化指標(biāo)和檢測非酒精性脂肪肝、酒精性脂肪肝、健康對(duì)照和嗜酒無脂肪肝四組人群TRAIL基因第五外顯子3’-非編碼區(qū)1525G/A、1595C/T位點(diǎn)

5、基因多態(tài)性，推測脂肪肝與TRAIL及其等位基因和基因型的關(guān)聯(lián)性。 方法： 采用病例對(duì)照的方法，對(duì)體檢人群用B超篩選出163例脂肪肝患者，其中NAFLD組84例，AFLD組79例，同時(shí)選擇同期體檢的102例對(duì)照者，其中80例健康對(duì)照者，22例嗜酒無脂肪肝者。全部選擇對(duì)象均空腹檢測轉(zhuǎn)氨酶、血糖、血脂等各項(xiàng)生化指標(biāo)，從中隨機(jī)選擇44例NAFLD患者、35例健康對(duì)照者，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immuno

6、sorbent assay，ELISA)法檢測血清可溶性TRAIL的水平。通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性內(nèi)切酶片段長度多態(tài)性(polymerase chain reaction-Restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)法檢測四組人群TRAIL基因第五外顯子3’-非編碼區(qū)(3’-untranslated region,3’-UTR)1525/1595兩位點(diǎn)基因多態(tài)性。同時(shí)從中選擇部分

7、對(duì)象通過基因測序驗(yàn)證PCR-RFLP法的正確性。 結(jié)果：(1)非酒精性脂肪肝組血清可溶性TRAIL的表達(dá)量明顯高于健康對(duì)照組(p=0.017，P<0.05)。(2)血清可溶性TRAIL濃度與甘油三酯(triglyceride，TG)含量呈正相關(guān)(r=0.368，P=0.014，P<0.05)。(3)中國漢族人群存在TRAIL基因1525G/A、1595C/T突變。(4)對(duì)中國漢族265名人員TRAIL基因第五外顯子3’-UTR區(qū)

8、1525、1595位點(diǎn)進(jìn)行多態(tài)性分析，發(fā)現(xiàn)同一個(gè)體兩位點(diǎn)G/A、C/T基因突變情況完全一致。(5)NAFLD、AFLD組1525/1595位點(diǎn)基因型分布與健康對(duì)照組比較均具有顯著性差異(p=0.016，P<0.05；p=0.013，P<0.05)；NAFLD組1525/1595位點(diǎn)G/C等位基因頻率明顯高于健康對(duì)照組(p=0.017，P<0.05)；AFLD組1525/1595位點(diǎn)G/C等位基因的頻率明顯高于健康對(duì)照組(p=0.022，

9、P<0.05)；(6)NAFLD組1525/1595位點(diǎn)GG/CC基因型TG量顯著高于AA/TT基因型個(gè)體的TG量(p=0.035，P<0.05)；(7)NAFLD組血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanineaminotransferase，ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartateaminotransferase，AST)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(glutamyltranspeptidase，GGT)、血糖(BloodGlucose，GL

10、U)、膽固醇(cholesterol，CH)、TG血清濃度高于健康對(duì)照組(無飲酒史)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；(8)AFLD組ALT、GLU、CH、TG血清濃度高于嗜酒無脂肪肝病組(p<0.05)；(9)AFLD組ALT、AST、GGT、GLU、CH、TG水平高于健康對(duì)照組(無飲酒史)(p<0.05)；(10)非條件多因素Logistic回歸分析身體質(zhì)量指數(shù)(bodymassindex，BMI)、腰臀比(waisthipratio，

11、WHR)、高血脂、GGT均是NAFLD的危險(xiǎn)因素。 結(jié)論：PCR-RFLP方法檢測TRAIL基因型特異性高，成熟，穩(wěn)定；中國漢族人群存在TRAIL基因第五外顯子3’-非編碼區(qū)1525G/A、1595C/T突變。(1)研究發(fā)現(xiàn)NAFLD患者血清TRAIL水平與肝脂肪病變有關(guān)，血清sTRAIL濃度與血清TG水平呈正相關(guān)。(2)發(fā)現(xiàn)中國漢族人群TRAIL基因第五外顯子3’-UTR1525G、1595C等位基因是與脂肪肝發(fā)病相關(guān)聯(lián)的基因