Period1、Period2調控鼠膠質瘤細胞生物節(jié)律性及擇時放療應用的體內研究.pdf

1、目的：在體內研究生物鐘基因 Period1(Per1)、Period2（Per2）對鼠膠質瘤和正常腦組織細胞中的表達節(jié)律及在不同時間段對膠質瘤細胞的放療調控作用，觀察在 Per1、Per2不同時間段放療后對膠質瘤和正常腦組織細胞的增殖及凋亡能力的影響。
　　方法：將體外培養(yǎng)的膠質瘤 C6細胞接種于 SD大鼠右側的尾狀核區(qū)，建立SD大鼠的膠質瘤動物模型。建好的膠質瘤動物模型在12h光照/12h黑暗的光暗條件下飼養(yǎng)3周，建立大鼠的生物

2、節(jié)律模型。
　　將建好的SD大鼠生物節(jié)律模型分別在4h,8h,12h,16h,20h,24h等不同時段處死，取右側的膠質瘤組織和對側的正常腦組織標記后迅速放于液氮中保存。應用Real-timePCR在轉錄水平上定量觀察大鼠腦膠質瘤細胞和正常腦組織細胞 Per1、Per2mRNA的及腫瘤組織 Per1、Per2蛋白表達情況。
　　利用直線加速器，在4h,8h,12h,16h,20h,24h等不同時段對建好的SD大鼠的節(jié)律模型進

3、行照射，利用PCNA免疫組化技術檢測不同時間點膠質瘤細胞及正常腦組織細胞的增殖情況，同時利用激光共聚焦技術檢測膠質瘤細胞及正常腦組織細胞的凋亡情況。
　　結果：Per1、Per2基因在腦膠質瘤及正常腦組織中都呈現出明顯的節(jié)律性。在膠質瘤細胞中，Per1、Per2的振蕩節(jié)律約為12小時，在這種節(jié)律表達中Per1的表達峰值在 ZT4，ZT16，谷值在 ZT12，ZT24，其中最高點在 ZT4，最低點在 ZT24；Per2的表達峰值在

4、ZT12，ZT24，谷值在 ZT8，ZT20，其中最高點在 ZT24，最低點在 ZT20；在正常腦組織細胞中，Per1、 Per2的振蕩節(jié)律約為24小時，在這種節(jié)律表達中Per1的表達峰值在 ZT8，谷值在 ZT24，其中最高點在 ZT8，最低點在 ZT24；Per2的表達峰值在 ZT12，谷值在 ZT24，其中最高點在 ZT12，最低點在 ZT24。腫瘤組織24h蛋白表達也顯示出與 mRNA表達相接近結果，也呈現出12h的節(jié)律表達。<

5、br>　　放療后利用PCNA檢測增殖情況顯示，在膠質瘤組織細胞中，Per1在其高表達及低表達時間點細胞的增值能力沒有顯著差異，在此時間點的正常腦組織細胞的增值能力無顯著差異；在膠質瘤組織細胞中，Per2高表達時間點腫瘤細胞的增殖能力明顯低于其低表達時間點，同時在此時間點的正常腦組織細胞的增值能力無顯著差異。
　　放療后利用Tunel法檢測膠質瘤細胞及正常腦組織細胞的凋亡情況，膠質瘤組織細胞中，Per1在其高表達和低表達時間點腫瘤細

6、胞的凋亡無顯著差異，在此時間點的正常腦組織細胞凋亡無顯著差異；Per2在其高表達時間點腫瘤細胞的凋亡明顯高于其低表達時間點，而此時間點的正常腦組織細胞凋亡無顯著差異。
　　結論：本實驗證實了Per1、Per2基因在大鼠體內膠質瘤細胞中的表達節(jié)律為12小時，正常組織中的表達節(jié)律為24小時。腫瘤組織中高表達的Per基因能夠誘導腫瘤細胞對電離輻射的敏感性，抑制腫瘤組織細胞的的增值，促進腫瘤組織的凋亡。同時也初步摸索了膠質瘤對射線的敏感節(jié)