脫氧核酶阻斷period1基因表達(dá)的體內(nèi)外研究.pdf

1、藥物成癮是長期濫用藥物造成的，已成為全球關(guān)心的醫(yī)學(xué)和社會(huì)問題，對(duì)藥物的精神依賴至今尚無理想的治療方法，本研究立足于近日基因period1(per1)和藥物成癮的關(guān)系，采用脫氧核酶阻斷per1基因的表達(dá)，深入探討per1基因?qū)λ幬锍砂a影響作用，進(jìn)而尋求解決藥物成癮的基因療法?！　♂槍?duì)period1(per1)RNA組分模板區(qū)設(shè)計(jì)合成10-23型脫氧核酶DRz164、DRz256，構(gòu)建peDNA3.1(+)-per1164:256體外轉(zhuǎn)錄

2、質(zhì)粒，T7/SP6體外轉(zhuǎn)錄后，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物和DRz164或DRz256在一定的條件下行體外切割反應(yīng)，用地高辛核酸檢測試劑盒檢測脫氧核酶對(duì)per1mRNA組分的體外切割效率。脂質(zhì)體介導(dǎo)法，pcDNA3-per1和DRz分別導(dǎo)入NIH3T3細(xì)胞，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)和流式細(xì)胞術(shù)檢測NIH3T3細(xì)胞per1表達(dá)?！　☆A(yù)先小鼠腦室注射DRz164，建立嗎啡成癮(慢性依賴)動(dòng)物模型，通過條件位置偏愛實(shí)驗(yàn)觀察DRz164對(duì)嗎啡獎(jiǎng)賞效應(yīng)的影響。最后一次嗎

3、啡(鹽水)注射后每隔4h提取腦組織蛋白，westernblot檢測Per1蛋白變化，觀察DRz164對(duì)Per1蛋白的影響。最后一次嗎啡(鹽水)注射后提取腦組織蛋白，westernblot檢測c-Fos蛋白、p42/44MAPK、P-p42/44MAPK以及P-SAPK/JNK變化，探討相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的變化。　　人神經(jīng)母細(xì)胞瘤(SH-SY5Y)細(xì)胞RA(10μM)分化一周，預(yù)先轉(zhuǎn)染DRz164，50％馬血清誘導(dǎo)2h后換無血清培養(yǎng)液并加