小鼠桑椹胚OPS法冷凍-管內(nèi)解凍和直接移植及體外共培養(yǎng)技術(shù)的研究.pdf

1、本研究以小鼠桑椹胚為材料，采用OPS法冷凍保存，研究了冷凍桑椹胚的管內(nèi)解凍和直接移植及解凍后胚胎與子宮單層上皮共培養(yǎng)對(duì)胚胎體內(nèi)、外發(fā)育的影響。 實(shí)驗(yàn)一，小鼠桑椹胚OPS法冷凍.管內(nèi)解凍和直接移植技術(shù)的研究。 目的：探索適合小鼠桑椹胚的管內(nèi)解凍程序，為小家畜冷凍胚胎的移植提供技術(shù)參數(shù)。 方法：小鼠桑椹胚采用OPS法冷凍保存，實(shí)施一步法和兩步法管內(nèi)解凍程序進(jìn)行解凍，回收胚胎進(jìn)行體外培養(yǎng)。并將管內(nèi)解凍最佳組的胚胎用OP

2、S作移植導(dǎo)管，直接移植到受體子宮角中，觀察胚胎的體內(nèi)發(fā)育情況。 結(jié)果：一步OPS法管內(nèi)解凍結(jié)果表明，在0.5 mol/L蔗糖溶液中平衡2～4 min組的囊胚發(fā)育率(93.64％～97.29％)與對(duì)照組(100％)無顯著性差異(P>0.05)；兩步OPS法管內(nèi)解凍結(jié)果表明，裝有胚胎的OPS在0.5 mol/L蔗糖中平衡3 min后插入0.25 mol/L蔗糖中平衡2 min組的囊胚發(fā)育率(100％)最佳，同對(duì)照組無顯著性差異(P>

3、0.05)；胚胎移植后體內(nèi)發(fā)育結(jié)果表明，管內(nèi)解凍組的產(chǎn)仔率(38.57％)和管外解凍組(42.86％)及新鮮對(duì)照組(51.19％)均無顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論： OPS法玻璃化冷凍的小鼠桑椹胚可以進(jìn)行管內(nèi)解凍和直接移植。 實(shí)驗(yàn)二，玻璃化冷凍胚胎與子宮單層上皮共培養(yǎng)的研究。 目的：本實(shí)驗(yàn)以昆明白系小鼠的桑椹胚為模型，采用冷凍胚胎與子宮單層上皮細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)，比較了共培養(yǎng)和單一培養(yǎng)體系中冷凍胚胎體外發(fā)育的差

4、異。 方法：胚胎采用OPS法冷凍，解凍后分別在體外無細(xì)胞條件下和在體外以子宮單層上皮細(xì)胞為飼養(yǎng)層條件下進(jìn)行培養(yǎng)，體外觀察胚胎的孵化、粘附、擴(kuò)展情況。 結(jié)果：胚胎在體外無細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中培養(yǎng)，冷凍組胚胎的黏附和擴(kuò)展率分別與新鮮對(duì)照組(40.90％vs62.53％和18.42％vs 37.56％)有顯著差異(P<0.05)；胚胎在體外共培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，冷凍組胚胎孵化、黏附和擴(kuò)展率分別與新鮮對(duì)照組(89.90％vs78.82％、