藍狐卵母細胞玻璃化冷凍保存、體外受精和胚胎移植技術的研究.pdf

1、本論文對藍狐卵母細胞OPS法玻璃化冷凍保存、體外受精和胚胎移植進行了系統(tǒng)研究，目的是對經(jīng)濟動物保種技術進行新探索，同時為狐貍的擴繁、改良和新品種培育工作提供快速有效的技術方法。 在藍狐卵母細胞OPS冷凍保存試驗中，比較了不同玻璃化液(EFS30、EFS40、EDFS30、EDFS40)對卵母細胞的冷凍保存效果，以及不同培養(yǎng)時間(0、24、48、72h)的卵母細胞在玻璃化液EDFS30中平衡不同時間(15、25、35、60s)后的

2、冷凍保存效果。結果表明，卵母細胞在玻璃化液EDFS30中的冷凍效果最好，解凍后形態(tài)正常率(91.66％)和成熟率(10.61％)與對照組無差異(P＞0.05)，其他玻璃化液所得結果與對照組間存在顯著差異(P＜0.05)。經(jīng)培養(yǎng)72h的卵母細胞在預處理液10％E+10％D中平衡30s、玻璃化液EDFS30中平衡25s后冷凍保存效果最好，解凍后成熟率為10.61％，與對照組(14.52％)無顯著差異(P＞0.05)，其它培養(yǎng)時間及冷凍平衡時

3、間所得結果與對照組間存在顯著差異(P＜0.05)。 藍狐卵母細胞在成熟液中分別培養(yǎng)0，24，48h后與獲能精子共孵育24h，然后將卵子洗凈繼續(xù)培養(yǎng)24h后進行固定染色壓片，對照組為相同培養(yǎng)液中培養(yǎng)48、72、96h后的卵母細胞固定染色壓片，觀察卵母細胞的成熟情況。結果表明，經(jīng)48、72、96h培養(yǎng)后受精組中GV期卵母細胞所占比例(分別為21.19％，13.71％，10.62％)比對照組(51.30％，47.92％，44.18％)

4、低(P＜0.01)，MⅡ期(包括原核)卵母細胞所占比例(11.86％，22.58％，18.58％)比對照組(7.83％，8.33％，10.78％)高(P＜0.05)，說明精子的穿入對卵母細胞的成熟有一定的促進作用。 在藍狐繁殖季節(jié)末期(4月末～5月初)進行了胚胎移植試驗，采用6只自然發(fā)情芬蘭改良藍狐為供體，第一次配種后第10～11天進行手術法沖取胚胎，共獲得59枚胚胎。將37枚可用胚通過手術法移植到3只比供體自然發(fā)情晚1～2天、