沉默維生素D結合蛋白基因對膀胱癌T24細胞生物學特性的影響.pdf

1、南方醫(yī)科大學2010級碩士學位論文沉默維生素D結合蛋白基因對膀胱癌T24細胞生物學特性的影響StudiesoftheinfluenceofT24bladdercancercell’Sbiologicabet晦viorbysilencingtheVitamine—Dbindingproteingene課題來源：自選學位申請人陳定南導師姓名譚萬龍教授專業(yè)名稱泌尿外科培養(yǎng)類型臨床型培養(yǎng)層次碩士研究生所在學院南方醫(yī)院2013年3月20日廣州摘要

2、的表達，特別是蛋白的表達，因而調控DNA的功能，在腫瘤的形成過程中越來越受到重視【l引。雖然在醫(yī)學上的提高和監(jiān)測膀胱癌的早期檢出率仍然是一個巨大的挑戰(zhàn)。而我們最近研究發(fā)現(xiàn)，維生素D結合蛋白(VitaminDBindingProtein，又稱為DBP或GC蛋白，以下簡稱GC蛋白)可以作為一個新的尿源性標志物16J，在早期的膀胱尿路上皮癌的檢測和監(jiān)測中發(fā)揮重要的作用，并有可能成為將來早期診斷膀胱癌的重要方法。但維生素D結合蛋白在膀胱移行上皮

3、癌細胞中的作用尚未被闡明，所以有必要對該蛋白在膀胱癌細胞中發(fā)揮的作用作進一步的研究和探討。實驗目的：本實驗旨在1研究GC蛋白在膀胱癌T24細胞株與正常膀胱粘膜上皮細胞中表達的差異；2通過RNAi干擾的方法，沉默膀胱癌T24細胞GC基因，下調膀胱癌T24細胞GC蛋白的表達，并進一步研究其對膀胱癌T24細胞生物學特性的影響。方法：第一部分：1細胞培養(yǎng)：選取膀胱癌T24細胞株及正常膀胱粘膜上皮細胞作為對照組進行細胞培養(yǎng)，分為膀胱癌細胞組和正常

4、膀胱粘膜上皮細胞組。2分別對兩組細胞提取總蛋白，應用免疫印跡法，經過蛋白電泳，轉膜，封閉雜交及曝光檢測GC蛋白在膀胱癌T24細胞株中的表達與該蛋白在正常膀胱粘膜上皮細胞株中表達的差異。第二部分：1細胞培養(yǎng)：選取膀胱癌T24細胞株分為GCsiRNA組作為實驗組、陰性對照組、空白對照組共三組，其中GCsiRNA組應用RNAi的方法，用脂質體轉染siRNA干擾片段，沉默膀胱癌T24細胞維生素D結合蛋白基因(簡稱GC基因)的表達；陰性對照組用脂