華蟾素對(duì)人膀胱癌T24細(xì)胞體外作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究華蟾素在體外對(duì)人膀胱癌T24細(xì)胞增殖的影響，細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用以及細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響，并探討其可能作用機(jī)制。
　　方法：實(shí)驗(yàn)分三部分。第一部分用 MTT法觀察不同濃度（0.625~80μg/mL）的華蟾素作用不同時(shí)間（24h、48h、72h）后對(duì)T24細(xì)胞增殖的影響。第二部分采用光學(xué)顯微鏡及熒光染色形態(tài)學(xué)觀察經(jīng)華蟾素作用后T24細(xì)胞產(chǎn)生的凋亡形態(tài)學(xué)改變，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期的變化。第三部分應(yīng)用劃痕愈

2、合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)華蟾素對(duì)T24細(xì)胞遷移能力的影響。
　　結(jié)果：1、MTT實(shí)驗(yàn)顯示華蟾素能顯著抑制 T24細(xì)胞的增殖，并隨藥物濃度升高（0.625~80μg/mL）和作用時(shí)間的延長（24~72h）而抑制作用增強(qiáng)，呈明顯濃度和時(shí)間依賴性。華蟾素（0.625~80μg/mL）作用24h后，T24細(xì)胞增殖抑制范圍為4.83％~40.34%，而在48h、72h后的抑制率分別為（5.65%~59.29%）和7.29%~87.19%。2、光學(xué)顯微鏡下

3、顯示不同濃度華蟾素（0，10，20，40和80μg/mL）作用于T24細(xì)胞4小時(shí)后，細(xì)胞密度呈劑量時(shí)間依賴性降低，同時(shí)可觀察到部分凋亡細(xì)胞所具有的典型形態(tài)學(xué)改變。流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度（0，10，20，40和80μg/mL）的華蟾素作用于 T24細(xì)胞24h后凋亡細(xì)胞所占比率分別為3.2%、9.91%、16.0%、21.1%和26.3%,和羥基喜樹堿對(duì)照組（17.2%）相比，細(xì)胞凋亡率呈明顯濃度依賴性增高，差異具有顯著性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示不

4、同濃度華蟾素作用T24細(xì)胞24h后，S期細(xì)胞逐漸增多，表明華蟾素可將T24細(xì)胞周期阻斷于S期，使之不能進(jìn)入G2/M期，并且呈劑量依賴性。3、劃痕實(shí)驗(yàn)表明華蟾素（5~80μg/mL）作用24h后，T24細(xì)胞的遷移能力逐漸降低，呈顯著的濃度依賴性。
　　結(jié)論：1、華蟾素能顯著抑制T24細(xì)胞增殖，其抑制作用呈時(shí)間和劑量依賴性。
　　2、華蟾素能誘導(dǎo) T24細(xì)胞凋亡，凋亡的誘導(dǎo)作用呈劑量時(shí)間依賴性。T24細(xì)胞周期阻斷于S期，不能進(jìn)入