三氧化二砷對(duì)膀胱癌T24細(xì)胞Apaf-1及APC基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究三氧化二砷（As2O3）對(duì)膀胱癌T24細(xì)胞中凋亡蛋白酶活化因子-1基因(apoptosis protease activating factor-1，Apaf-1)和腺瘤性結(jié)腸息肉病相關(guān)基因(Adenomatous polyposis coli，APC)表達(dá)的影響，并初步探討三氧化二砷作為抗膀胱癌新藥的可行性及可能作用機(jī)制。
　　方法：采用噻唑藍(lán)（MTT）法檢測(cè)膀胱癌T24細(xì)胞存活率，觀察As2O3對(duì)細(xì)胞存活率的影響；用

2、Hoechst33342熒光染色，觀察不同處理?xiàng)l件下凋亡細(xì)胞的核形態(tài)變化；原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)法（TUNEL）檢測(cè)膀胱癌T24細(xì)胞凋亡指數(shù)；Transwell法檢測(cè)As2O3對(duì)膀胱癌T24細(xì)胞侵襲力的影響；半定量RT-PCR法檢測(cè)抑癌基因Apaf-1 mRNA、APC mRNA的表達(dá)；Western-blotting法檢測(cè)抑癌基因Apaf-1蛋白、APC蛋白的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：⑴與空白對(duì)照組（As2O30μmol/L）比較，加入不

3、同濃度的As2O3(1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L)，作用于T24細(xì)胞24、48和72 h后，每時(shí)間組內(nèi)部細(xì)胞存活率明顯降低，細(xì)胞活性呈劑量依賴性下降。當(dāng)As2O3濃度為4μmol/L和8μmol/L時(shí)，分別作用T24細(xì)胞24、48和72 h后，細(xì)胞活性呈時(shí)間依賴性下降（P<0.05，P<0.01）。⑵Hoechst33342熒光染色觀察，正常對(duì)照組細(xì)胞呈均勻熒光染色，細(xì)胞核形態(tài)規(guī)則圓形或者橢圓形，As2

4、O32μmol/L處理細(xì)胞24 h后，可見部分細(xì)胞出現(xiàn)致密濃染、核碎裂；與對(duì)照組相比，TUNEL檢測(cè)As2O3可以明顯促進(jìn)細(xì)胞凋亡，且As2O3對(duì)膀胱癌T24細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用在1μmol/l～8μmol/l濃度范圍內(nèi)具有劑量和時(shí)間依賴性（P<0.05，P<0.01）。⑶Transwell檢測(cè)As2O3在0.1μmol/L～0.4μmol/L區(qū)間內(nèi)可以明顯降低膀胱癌T24細(xì)胞的侵襲力，且侵襲力呈劑量依賴性降低（P<0.05，P<0.01

5、）。⑷半定量RT-PCR結(jié)果，與對(duì)照組比較As2O3在2μmol/L～8μmol/L作用72 h后使膀胱癌T24細(xì)胞Apaf-1 mRNA、APC mRNA表達(dá)升高，且兩者分別呈現(xiàn)劑量依賴性升高（P<0.05，P<0.01）。⑸Western-blotting結(jié)果，與對(duì)照組比較As2O3在2μmol/L～8μmol/L作用72 h后使膀胱癌T24細(xì)胞Apaf-1蛋白和APC蛋白表達(dá)升高，且兩者分別呈現(xiàn)劑量依賴性升高（P<0.05，P<0

6、.01）。
　　結(jié)論：①As2O3處于1μmol/L～8μmol/L范圍內(nèi)時(shí)，對(duì)T24細(xì)胞增殖抑制呈劑量依賴性；同時(shí)As2O3濃度為4μmol/L和8μmol/L時(shí)，其對(duì)T24細(xì)胞增殖抑制還存在時(shí)間依賴性。②As2O3可以促進(jìn)膀胱癌T24細(xì)胞凋亡且其在1μmol/l～8μmol/l濃度范圍內(nèi)凋亡率具有有劑量和時(shí)間依賴性升高。③As2O3可以降低膀胱癌T24細(xì)胞的侵襲力，且As2O3在0.1μmol/L～0.4μmol/L范圍內(nèi)時(shí)，