microRNA-100對膀胱癌T24細胞增殖的影響及對VEGF和survivin蛋白的調(diào)節(jié)研究.pdf

1、目的：通過實驗測定microRNA-100（miRNA-100）對膀胱癌T24細胞系中血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和survivin蛋白及mRNA表達的調(diào)節(jié)作用，探討miR-100對膀胱癌T24細胞增殖和凋亡的影響。
　　方法：用人工合成的miR-100相應(yīng)的雙鏈互補DNA片段，插入pSilencerTM3．1-H1 neo載體表達載體，經(jīng)測序鑒定后作為micr

2、oRNA的表達質(zhì)粒；采用瞬時轉(zhuǎn)染方法用LipofeetamineTM2000(脂質(zhì)體2000)將miR-100高表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進膀胱癌T24細胞，培養(yǎng)24小時后選擇成功轉(zhuǎn)染存活率較高的細胞系繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)48小時后用RT-PCR技術(shù)和Western blot方法分別檢測該細胞系中VEGF和survivin的mRNA和蛋白表達情況，用四甲基偶氮唑藍（MTT）法檢測膀胱癌T24細胞在24h、36h、48h和60h增殖的變化情況。再采用Anne

3、xin V/PI雙染色法進行流式細胞術(shù)檢測膀胱癌細胞T24的凋亡情況。統(tǒng)計學方法整理分析各組實驗數(shù)據(jù)結(jié)果。
　　結(jié)果：
　　1.Western blot結(jié)果顯示miR-100能夠抑制VEGF（6.20±1.13）％，P<0.05。和survivin蛋白的表達（5.60±1.02）%，P<0.05。
　　2.RT-PCR方法分析顯示VEGF(9.85±3.20)%,P<0.05.和survivin mRNA水平降低（8.

4、22±3.21）%，P<0.05。
　　3.MTT顯示轉(zhuǎn)染后細胞的生長速率比未轉(zhuǎn)染的細胞明顯減慢,繼續(xù)培養(yǎng)60小時后抑制率（11.54±4.07）%，P<0.05。
　　4.流式細胞儀檢測顯示：轉(zhuǎn)染miR-100后的T24細胞凋亡率較空白組和對照組增加（46.35±2.14%）, P<0.05。細胞周期中G0/G1期細胞比率增高。
　　結(jié)論：
　　1.miR-100抑制T24膀胱癌細胞增殖，提示可能是miR-10