維生素D對化學(xué)物致DNA損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討維生素D對環(huán)磷酰胺和苯致DNA損傷的保護(hù)作用。
　　 方法:(1)CHL細(xì)胞（中國倉鼠肺成纖維細(xì)胞）在含1，25(OH)2D3濃度為0、10、20、50、100nM的培養(yǎng)液培養(yǎng)后加入S9混合液和終濃度為50μg/ml的環(huán)磷酰胺進(jìn)行處理。染色體畸變實(shí)驗(yàn)觀察CHL細(xì)胞染色體畸變情況。免疫熒光法檢測細(xì)胞中γ-H2AX焦點(diǎn)形成。流式細(xì)胞儀測定CHL細(xì)胞ROS水平。(2)雄性ICR小鼠隨機(jī)分為5組，其中四組小鼠給予0、1000、

2、5000、10000IU維生素D3總體積為0.1ml的茶油注射液，共兩周，每周一次，最后一次注射后給予40mg/kg環(huán)磷酰胺腹腔注射。流式細(xì)胞儀自動化檢測方法分析小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率。彗星實(shí)驗(yàn)檢測小鼠淋巴細(xì)胞損傷情況。免疫熒光法檢測骨髓細(xì)胞γ-H2AX焦點(diǎn)形成。流式細(xì)胞儀測定骨髓細(xì)胞內(nèi)ROS水平。(3)ICR小鼠隨機(jī)分為正常對照組、苯染毒組和VD+苯處理組。VD+苯處理組在染苯處理前提前一周給予維生素D3注射，另外兩組給予等量注射

3、用茶油。在第2次維生素D3注射后對苯染毒組和VD+苯處理組小鼠染苯處理。流式細(xì)胞儀檢測小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率。彗星實(shí)驗(yàn)檢測小鼠外周血淋巴細(xì)胞損傷情況。ROS熒光探針流式細(xì)胞儀檢測小鼠骨髓細(xì)胞活性氧水平。
　　 結(jié)果:(1)體外試驗(yàn)顯示給予環(huán)磷酰胺處理以后CHL細(xì)胞畸變率顯著升高，且細(xì)胞內(nèi)γ-H2AX焦點(diǎn)數(shù)目升高明顯，說明環(huán)磷酰胺引起CHL細(xì)胞DNA嚴(yán)重?fù)p傷。染色體畸變分析和γ-H2AX檢測結(jié)果顯示1，25(OH)2D3處理后

4、CHL細(xì)胞DNA損傷有顯著改善。(2)體內(nèi)試驗(yàn)顯示環(huán)磷酰胺處理小鼠嗜多染紅細(xì)胞微核率和彗星實(shí)驗(yàn)各指標(biāo)以及骨髓細(xì)胞γ-H2AX焦點(diǎn)數(shù)目顯著上升，DNA損傷嚴(yán)重。維生素D處理組小鼠嗜多染紅細(xì)胞微核率下降明顯，與單純環(huán)磷酰胺處理組相比，彗星實(shí)驗(yàn)的尾部DNA百分含量、彗尾長度和Olive尾距三者均明顯下降，γ-H2AX檢測結(jié)果顯示維生素D3可以減輕DNA雙鍵斷裂程度。(3)與正常對照組相比，小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率和彗星實(shí)驗(yàn)各指標(biāo)顯示苯染毒組

5、DNA損傷嚴(yán)重，骨髓細(xì)胞ROS水平顯著升高。經(jīng)維生素D處理后小鼠微核率和彗星實(shí)驗(yàn)各指標(biāo)明顯下降，DNA損傷情況有明顯改善，VD+苯處理組小鼠骨髓細(xì)胞ROS水平顯著低于苯染毒組。
　　 結(jié)論:(1)活性維生素D可以減少環(huán)磷酰胺致CHL細(xì)胞的染色體畸變率，這種保護(hù)作用與其減少γ-H2AX的陽性表達(dá)有關(guān)。(2)維生素D可以減少環(huán)磷酰胺致小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率以及外周血淋巴細(xì)胞DNA的損傷效應(yīng)。這種保護(hù)作用與其可以減少嚴(yán)重DNA雙鏈