維生素E對(duì)鎘致小鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的:
　　探討維生素E（Vitamin E，VE）對(duì)鎘致小鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元與星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。
　　方法:
　　一、體外實(shí)驗(yàn)（1）體外培養(yǎng)原代大腦皮質(zhì)神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞，并選擇神經(jīng)元特異性蛋白（MAP2）、星形膠質(zhì)細(xì)胞特異性蛋白（GFAP）和小膠質(zhì)細(xì)胞特異性蛋白（CD11b）進(jìn)行細(xì)胞純度鑒定；（2）以不同濃度鎘溶液染毒，于倒置相差顯微鏡下分別觀察神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)形態(tài)學(xué)變化，加入維生素E干預(yù)

2、后，觀察維生素E對(duì)染鎘皮質(zhì)神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)，分光光度計(jì)檢測(cè)SOD活性、MDA含量，Western blot檢測(cè)Bcl-2/Bax、caspase-3蛋白表達(dá)。二、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)（1）健康昆明種雄性小鼠60只隨機(jī)分為3組，每組20只。慢性鎘中毒組（Cd組）：氯化鎘溶液2mg/kg經(jīng)腹腔皮下注射，每周兩次；慢性鎘中毒加維生素E組（Cd+VE組）：注射氯化鎘染毒，同時(shí)每天進(jìn)行維生素E溶液10 mg/kg灌胃；對(duì)照組：注射生理鹽水。（2）

3、建模13周后，Y形迷宮檢測(cè)各組小鼠學(xué)習(xí)記憶能力，檢測(cè)大腦皮質(zhì)組織勻漿SOD活性和MDA含量，尼氏染色觀察額葉皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)元尼氏體變化，透射電鏡觀察大腦額葉皮質(zhì)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)變化，免疫組化檢測(cè)大腦額葉皮質(zhì)區(qū)GFAP和caspase-3陽性表達(dá)細(xì)胞，Western blot檢測(cè)大腦皮質(zhì)組織caspase-3的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　（1）體外培養(yǎng)的原代大腦皮質(zhì)神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞，經(jīng)免疫熒光鑒定純度均可達(dá)到90%以上；（2）體

4、外實(shí)驗(yàn)中，與對(duì)照組比較，隨著染鎘濃度的增加和染鎘時(shí)間的延長，神經(jīng)元與星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)損傷逐漸加重；加入維生素E干預(yù)后，與單純的染鎘組比較，神經(jīng)元與星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)損傷減輕，細(xì)胞的SOD活性升高、MDA含量下降（P<0.05），Bcl-/Bax比值升高、caspase-3蛋白表達(dá)下降（P<0.05）；VE干預(yù)組與對(duì)照組比較，各項(xiàng)指標(biāo)仍有差異（P<0.05）；（3）在體研究中，Cd組小鼠學(xué)習(xí)記憶能力明顯低于對(duì)照組和Cd+VE組（P<0.

5、05）；Cd組小鼠大腦皮質(zhì)組織中SOD活性均低于對(duì)照組和Cd+VE組、MDA含量均高于對(duì)照組和Cd+VE組（P<0.05）；與對(duì)照組和Cd+VE組相比，Cd組大腦皮質(zhì)額葉神經(jīng)元尼氏體減少，神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)損傷嚴(yán)重，GFAP與caspase-3陽性細(xì)胞增多，大腦皮質(zhì)組織caspase-3蛋白表達(dá)顯著增高（P<0.05）；與對(duì)照組比較，Cd+VE組大腦皮質(zhì)神經(jīng)元尼氏體輕度減少，神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)輕度受損，caspase-3與GFAP陽性細(xì)胞高于對(duì)