芹菜素對腦缺血不同時間再灌注損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、目的：探討炎癥反應、氧化損傷和核轉錄因子κB(NF-κB)在大鼠腦缺血不同時間再灌注損傷中的作用以及芹菜素的神經保護作用及機制. 方法：采用線栓法建立大鼠腦缺血(1.5h)及不同時間再灌注損傷模型.動物隨機分為假手術組(Sham-opcrated,S,n=20)、模型組(Modd,M,n=80)和芹菜素組(Apigenin,A,n=80).M組和A組按再灌注時間不同又分為再灌注2411組(M24h,A<,24h>,n=20)、4

2、8h組(M<,48h>,A<,48h>,n=20)、72h組(M<,72h>,A<,72h>,n=20)、7d組(M<,7d>,A<,7d>,n=20),各4小組,共9小組.A組于再灌注同時及其后的每24h腹腔注射11.6×10<'-3>M芹菜素溶液25mg/kg(0.8ml/100g),S組和M組在相同的時間注射等體積生理鹽水.各組動物麻醉清醒后均給予神經行為學評分.每組大鼠各8只觀察至規(guī)定時間予頸椎脫臼處死,取左側大腦半球(缺血再灌

3、注側)制成腦組織勻漿,分別采用硫代巴比妥酸法(TBA)測MDA含量,黃嘌呤氧化酶(XTO)法測超氧化物歧化酶(SOD)活性,比色法測誘導型一氧化氮合酶(iNOS)活性,酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測腫瘤壞死因子a(TNF-α)、白細胞介素1β(IL-1β)含量.此外,每組5只大鼠經心臟灌注后做腦組織切片,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色觀察腦梗死灶,并用圖像處理軟件測梗死灶體積;每組7只大鼠經心臟灌注固定后分別用免疫組化法檢

4、測NF-κBp65表達、光鏡及電鏡觀察細胞形態(tài)學變化. 結果： 1.神經行為學評分:M組在腦缺血再灌注后7d神經行為學評分較M組之前各時間點均有顯著減小(P<0.01或P<0.05).A組在腦缺血再灌注后7d神經行為學評分較24h和48h均有顯著減小(P<0.01),A組在再灌注后72h神經行為學評分較再灌注2411有減小(P<0.05).A組在再灌注后72h神經行為學評分較相應時間M組有顯著減小(P<0.05),余各結

5、論:相應時間點間比較無統(tǒng)計學意義. 2.腦組織切片TTC染色:M<,24h>組病灶側示白色梗死灶,多位于嗅溝上方的額顳頂葉皮質和尾殼核;M<,48h>組梗死灶范圍擴大,額顳頂葉皮質和尾殼核梗死灶融合,梗死灶分別較M<,24h>組、M<,72h>組及M<,7d>組大,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01).A<,48h>組和A<,72h>組的梗死體積較相應M組減小,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05).S組未見有白色梗死灶. 3.大

6、鼠腦組織細胞結構變化:M組病變側皮層、海馬的細胞水腫、間質水腫明顯,呈空泡化,M<,48h>組病變最明顯;神經元和神經膠質細胞均有核固縮表現(xiàn),胞漿細胞器擴張、溶解,空泡化,膠質細胞病變較神經元嚴重,以M<,24h>組病變最明顯.A組各時間點組織水腫有減輕,神經細胞超微結構改變不明顯. 4.大鼠腦組織MDA含量、SOD活性測定:與S組比較,M組和A組各時間點MDA含量均有升高(P<0.01或P<0.05),M<,72h>組明顯高于

7、M<,24h>和M<,7d>組,差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05);A<,48h>組和A<,72h>組與相應M組比較有顯著降低(p<0.05).M組和A<,24h>組及A<,48h>組SOD活性與S組比較顯著降低(P<0.01或P<0.05),其余組雖有降低,但與S組比較,差異無統(tǒng)計學意義.A組SOD活性均較相應M組顯著升高(p<0.05),除外M<,24h>組. 5.大鼠腦組織TNF-α含量測定:與S組比較, M組和A組TNF-

8、α含量均顯著升高,尤以M組明顯(P<0.01).A<,48h>組和A<,72h>組較相應M組顯著降低,以A72h組為著(P<0.01). 6.大鼠腦組織IL-1β含量測定:M組和A組IL-1β含量均較S組明顯升高(P<0.01或P<0.05),除外A<,7d>組.M<,48h>組較M<,24h>組顯著升高(P<0.05).A<,48h>組和A<,72h>組較相應M組顯著降低(P<0.05). 7.大鼠腦組織iNOS活性測

9、定:與S組比較,M組和A組均明顯升高(P<0.05或P<0.01).M<,72h>組較M<,24h>組升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05).A<,72h>組和A<,7d>組較相應M組顯著降低(P<0.05). 8.大鼠腦組織NF-kBp65表達:M組和A組有明顯活化移位,其表達與S組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),除外A<,7d>組.A<,72h>組和A<,7d>組較相應M組活化顯著減弱(P<0.05). 結論：1.