健脾化瘀方對缺氧誘導的人結(jié)腸癌SW480細胞株生物學影響及相關(guān)機制研究.pdf

1、目的：
　　探討健脾化瘀方對缺氧誘導的人結(jié)腸癌細胞SW480生物學行為的影響，從腫瘤微環(huán)境角度進一步闡明健脾化瘀方抑制結(jié)腸癌生長轉(zhuǎn)移的可能機制，為中藥復方治療腫瘤提供一些理論支持。
　　方法：
　　采用四甲基偶氮唑藍法（MTT法）檢測缺氧對照組和不同濃度的健脾化瘀方對缺氧誘導的結(jié)腸癌細胞SW480細胞株增殖能力的影響;采用基質(zhì)-細胞粘附實驗觀察缺氧對照組和不同濃度的健脾化瘀方對缺氧誘導的結(jié)腸癌細胞SW480細胞株黏附能

2、力的影響;采用細胞黏附人工重組基底膜培養(yǎng)小室法（Transwell小室）比較缺氧組和健脾化瘀方對缺氧誘導的結(jié)腸癌細胞SW480侵襲能力的影響;采用實時熒光定量PCR法(realtime PCR)和蛋白質(zhì)印跡法(Western Bolt)檢測健脾化瘀方對缺氧誘導的結(jié)腸癌細胞SW480細胞株上皮細胞-間質(zhì)化(EMT)相關(guān)基因(HIF-1α蛋白、轉(zhuǎn)錄因子Snail、E-鈣黏蛋白(epithelial-cadherin，E-cadherin)、

3、波形蛋白(Vimentin)表達的影響。
　　結(jié)果：
　　1、使用不同濃度的CoCl2誘導結(jié)腸癌SW480細胞株缺氧后細胞增殖能力逐漸減弱，各濃度抑制率差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05):高濃度的健脾化瘀方對缺氧誘導的結(jié)腸癌SW480細胞有明顯抑制其增殖能力的作用，較中低劑量的給藥濃度差異明顯，其差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　2、缺氧誘導的結(jié)腸癌SW480細胞較空白組黏附能力明顯增強;不同濃度的健脾化瘀方作用

4、于缺氧誘導的結(jié)腸癌SW480細胞后，細胞黏附能力明顯下降，并且呈現(xiàn)時間依賴性。
　　3、缺氧誘導的結(jié)腸癌SW480細胞侵襲能力較空白組明顯增強;不同濃度的健脾化瘀方在對缺氧誘導的人結(jié)腸癌細胞SW480給藥24h后發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，能顯著抑制SW480細胞的侵襲能力，當濃度達到0.4mg/ml以及0.8mg/ml時，倒置顯微鏡下顯示穿過小室的細胞數(shù)量較對照組明顯稀少，且呈濃度依賴關(guān)系。
　　4、實時熒光定量PCR法以及蛋白質(zhì)

5、印跡法實驗顯示:與缺氧對照組相比，缺氧誘導因子(HIF-1α)、波形蛋白(Vimentin)及轉(zhuǎn)錄因子Snail mRNA和蛋白在結(jié)腸癌SW480細胞中的表達隨著健脾化瘀方濃度的升高而逐漸降低;E-鈣黏蛋白(E-cadherin)mRNA和蛋白在結(jié)腸癌SW480細胞中的表達隨著健脾化瘀方濃度的升高而逐漸增加。
　　結(jié)論：
　　1、CoCl2化學模擬缺氧微環(huán)境下的結(jié)腸癌細胞SW480細胞增殖能力明顯下降;不同濃度的健脾化瘀方對

6、缺氧微環(huán)境下的結(jié)腸癌細胞增殖抑制能力有一定增強作用，其對濃度有一定依賴性。
　　2、缺氧微環(huán)境下結(jié)腸癌細胞SW480細胞黏附及侵襲能力明顯增強，不同濃度的健脾化瘀方作用于缺氧微環(huán)境下的結(jié)腸癌SW480細胞后黏附及侵襲能力下降，且隨著時間的推移逐漸減弱。
　　3、健脾化瘀方抑制缺氧微環(huán)境下結(jié)腸癌SW480細胞侵襲轉(zhuǎn)移的作用機制可能與逆轉(zhuǎn)上皮細胞-間質(zhì)化轉(zhuǎn)變有關(guān):下調(diào)HIF-1α、Vimentin及轉(zhuǎn)錄因子Snail基因和蛋白的