前軟骨干細胞生物學特性的影響.pdf

1、目的：平板及微球培養(yǎng)純化的前軟骨干細胞（PSCs），對其進行動態(tài)壓應力刺激及添加甲狀腺激素相關肽（PTHrP）干預，進一步揭示前軟骨干細胞的增殖、分化規(guī)律及其調(diào)控機制，為選擇有效干預措施治療骺板發(fā)育異常、修復及重建骺板等提供理論及實驗依據(jù)。
　　 方法：取材新生SD大鼠股骨干骺端軟骨，免疫磁珠分選純化，分別進行二維及三維分組培養(yǎng)，隨機分組后適宜壓應力(90mmg)及添加不同濃度PTHrP干預下連續(xù)培養(yǎng)，并設對照組（不干預），細胞

2、計數(shù)及cck-8法檢測細胞增殖情況，免疫組化法測定三維培養(yǎng)軟骨細胞成軟骨特異性細胞外基質(zhì)II型膠原（Collagen II），RT-PCR法測定Collagen II、聚集蛋白聚糖（Aggrecan）、PTHrP、X型膠原、TGF-β1等。根據(jù)實驗結果評價應力及PTHrP對前軟骨干細胞生物學性狀的影響。
　　 結果：
　　 1.免疫磁珠分選培養(yǎng)出生長狀態(tài)良好的前軟骨干細胞，免疫組化、免疫熒光鑒定顯示細胞穩(wěn)定表達相對特異性

3、標志物FGFR-3與PCNA；適宜參數(shù)壓應力刺激與PTHrP干預組細胞培養(yǎng)至5代以上仍狀態(tài)較好，而對照組細胞致5代已老化；
　　 2.細胞計數(shù)及cck-8法檢測細胞增殖能力有效干預組較對照組增大（P＜0.05）其中應力刺激與PTHrP干預有協(xié)同效應。
　　 3.RT-PCR檢測結果顯示有效刺激實驗組Collagen II、aggrecan、Sox9表達較空白對照組升高，X型膠原降低，（P＜0.05）90mmg壓力刺激組P