體外間接共培養(yǎng)兔膝關(guān)節(jié)軟骨單位對軟骨細胞生物學特性的影響.pdf

1、目的：
　　通過Transwell間接共培養(yǎng)技術(shù)研究兔膝關(guān)節(jié)軟骨單位對軟骨細胞生物學特性的影響,為組織工程技術(shù)修復損傷軟骨選取良好種子細胞提供依據(jù)。
　　方法：
　　用不同消化酶將2月齡新西蘭兔膝關(guān)節(jié)軟骨分別消化成軟骨細胞和軟骨單位。按2×105個細胞/孔濃度接種于Transwell雙層細胞培養(yǎng)板。實驗組：軟骨單位接種于上室，軟骨細胞接種于下室；對照組：下室接種軟骨細胞，上室未接種。分別在2、4、6、8天提取各組Tra

2、nswell下室軟骨細胞進行指標檢測。早期凋亡率檢測：Annexin V和7-AAD標記流式細胞儀檢測，TUNEL染色熒光顯微鏡檢測；增殖率檢測：PCNA標記流式細胞儀檢測，EdU染色熒光顯微鏡檢測；相關(guān)基因相對表達量檢測：PCR技術(shù)檢測AGG、Col-II、MMP-13基因相對表達量。
　　結(jié)果：
　　Annexin V和7-AAD標記流式細胞儀檢測Transwell下室軟骨細胞早期凋亡率發(fā)現(xiàn)，在實驗早期（第2、4天）實驗

3、組與對照組Transwell下室軟骨細胞早期凋亡率差異不明顯，差別沒有統(tǒng)計學意義（p>0.05）。在實驗第6天、第8天實驗組軟骨細胞早期凋亡率明顯低于對照組（P<0.05）。TUNEL染色熒光顯微鏡檢測Transwell下室軟骨細胞凋亡率發(fā)現(xiàn)，實驗組和對照組軟骨細胞凋亡率沒有顯著差異，但有實驗組軟骨細胞凋亡率低于對照組的趨勢。PCNA標記流式細胞儀檢測Transwell下室軟骨細胞增殖率發(fā)現(xiàn)，在實驗早期（第2、4天）實驗組與對照組Tra

4、nswell下室軟骨細胞增值率差異不明顯，差別沒有統(tǒng)計學意義（p>0.05）。在實驗第6天、第8天實驗組軟骨細胞增殖率明顯高于對照組
　?。≒<0.05）。EdU染色熒光顯微鏡檢測Transwell下室軟骨細胞增殖率發(fā)現(xiàn)，第6天實驗組軟骨細胞增殖率明顯高于對照組（P<0.05）。PCR技術(shù)檢測Transwell下室軟骨細胞相應(yīng)基因表達量發(fā)現(xiàn)，在實驗早期（第2、4天）實驗組與對照組Transwell下室軟骨細胞AGG、Col-II，

5、MMP-13基因表達較為相似，實驗組與對照組差異不明顯，差別沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。在實驗后期AGG、Col-II基因相對表達量在第6天、第8天時實驗組明顯高于對照組（P<0.05），MMP-13表達量在第8天時對照組明顯高于實驗組（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.軟骨單位作為關(guān)節(jié)軟骨的基本功能單位，能夠更長時間有效抵抗或延緩軟骨細胞凋亡、維持軟骨細胞增殖及正向調(diào)節(jié)軟骨基質(zhì)相關(guān)物質(zhì)的基因表達。
　　2.軟