胃癌細(xì)胞耐藥的形態(tài)學(xué)特征和相關(guān)基因的克隆及功能研究.pdf

1、目的:首先應(yīng)用透射電子顯微鏡,共聚焦顯微鏡技術(shù)檢測(cè)胃癌耐藥細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化;通過(guò)流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)化療藥物對(duì)親本敏感胃癌細(xì)胞和耐藥細(xì)胞的細(xì)胞周期的影響.并根據(jù)所觀察到的形態(tài)學(xué)特征,從63個(gè)被差異顯示出的耐藥相關(guān)基因中選出6個(gè)基因,分別為NPD017、TTC-1、ME3、MRS2L、TBPIP和MAD2.克隆鑒定該六個(gè)耐藥相關(guān)基因,并進(jìn)行基因的功能學(xué)分析,以探討耐藥相關(guān)基因可能的耐藥作用機(jī)制.結(jié)論:(1).耐藥細(xì)胞胞內(nèi)藥物分布表現(xiàn)為核漿比

2、例逆轉(zhuǎn),藥物分布具有內(nèi)膜系統(tǒng)的特征,提示核漿轉(zhuǎn)運(yùn)和胞外分泌途徑參與了胃癌細(xì)胞多藥耐藥性的形成.(2).耐藥細(xì)胞核膜明顯地不規(guī)則、深陷甚至卷曲.細(xì)胞膜之間突觸樣的聯(lián)系增多,并能形成細(xì)胞間小管結(jié)構(gòu).提示耐藥細(xì)胞的核膜和核孔的形態(tài)和組成可能發(fā)生了一定的變化,胃癌耐藥細(xì)胞可能借助其特有的結(jié)構(gòu)細(xì)胞間小管,將蓄積藥物通過(guò)胞外分泌和脂質(zhì)分泌途徑排出體內(nèi).(3).阿霉素能將親本細(xì)胞SGC7901阻滯在G2/M期,而耐藥細(xì)胞不被阻滯在G2/M期.能夠進(jìn)入

3、下一個(gè)細(xì)胞周期,細(xì)胞周期分布基本上無(wú)變化.這提示耐藥細(xì)胞能夠克服化療藥物引起的細(xì)胞周期阻滯,涉及細(xì)胞周期調(diào)節(jié)的分子參與了胃癌細(xì)胞耐藥性的形成.(4).通過(guò)縱向和橫向綜合比較該六個(gè)耐藥相關(guān)基因,初步得出MAD2β和ME3具有較強(qiáng)的促進(jìn)胃癌細(xì)胞產(chǎn)生多藥耐藥性的作用,MAD2β和ME3基因所導(dǎo)致的耐藥性既能使胃癌細(xì)胞對(duì)DNA損傷劑MMC和ADR產(chǎn)生一定的抵抗性,也能使胃癌細(xì)胞對(duì)以微管為靶向的藥物產(chǎn)生一定的抵抗性,具有較廣泛的耐藥譜,提示二者可