胃癌細(xì)胞中MUC1與HER2的表達(dá)與胃癌細(xì)胞耐藥的相關(guān)性研究.pdf

1、胃癌是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一。近來(lái)發(fā)現(xiàn)分子靶向藥物聯(lián)合傳統(tǒng)的化療能顯著提高進(jìn)展期胃癌的化療效果，并提高胃癌患者總體生存率。最近，一項(xiàng)臨床研究發(fā)現(xiàn)曲妥株單抗是第一個(gè)對(duì)胃癌顯示出總生存優(yōu)勢(shì)(OS)的生物靶向制劑。曲妥株單抗是針對(duì)HER2/neu原癌基因產(chǎn)物的人源化單克隆抗體，能特異的作用于人表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體-2（HER2），靶向結(jié)合HER2的胞外區(qū)域從而抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。自從曲妥株單抗上市，其在提高乳腺癌患者

2、的生存率方面效果明顯。但值得注意的是，部分HER2陽(yáng)性的乳腺癌患者有原發(fā)耐藥現(xiàn)象，也有部分曲妥株單抗治療有效的乳腺癌患者在治療1年后出現(xiàn)繼發(fā)耐藥。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌對(duì)曲妥株單抗耐藥的機(jī)制可能與膜型黏蛋白1（Mucin 1，MUC1）有關(guān)。盡管目前研究顯示曲妥株單抗對(duì)胃癌有顯著的治療優(yōu)勢(shì)，但是胃癌細(xì)胞中HER2和MUC1的表達(dá)與胃癌的病理學(xué)特征及預(yù)后等關(guān)系并不明確，胃癌細(xì)胞中MUC1的表達(dá)是否會(huì)誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞對(duì)曲妥株單抗耐藥亦不清楚。因此，

3、本研究的目的旨在探討胃癌細(xì)胞中HER2和MUC1的表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞曲妥株單抗耐藥的影響，以期為判斷胃癌患者預(yù)后，制定個(gè)體化的治療方案提供較好的依據(jù)；為尋找新的胃癌分子治療靶標(biāo)提供理論依據(jù)。
　　 本研究從以下三個(gè)部分來(lái)探討胃癌細(xì)胞中HER2和MUC1的表達(dá)及其對(duì)胃癌細(xì)胞曲妥株單抗耐藥之影響：
　　 第一章 HER2和MUC1在胃癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性研究
　　 目的：觀察胃癌組織中HER2和MUC1的表達(dá)情況及其與

4、胃癌病理學(xué)特征的關(guān)系，并初步探討胃癌組織中HER2和MUC1表達(dá)有無(wú)相關(guān)性。
　　 方法：應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)人胃癌組織中HER2和MUC1的表達(dá)，并利用圖像分析軟件IPP6.0，記錄免疫組織化學(xué)染色圖片，觀察HER2、MUC1在胃癌組織中的表達(dá)情況，并分析兩者之關(guān)系及其與胃癌生物學(xué)行為的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：（1）80例胃癌中HER2表達(dá)陽(yáng)性率為26.25％(21/80),其陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)深度、腫瘤部位及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)

5、移密切相關(guān)(p<0.05), 與患者的年齡、病理類型、腫瘤大小及TNM分期則無(wú)明顯關(guān)系(p＞0.05)。（2）MUC1在正常胃黏膜組織和癌組織中廣泛分布。其在正常胃體腺細(xì)胞分布于胞漿和胞膜，主要位于細(xì)胞的基底部近細(xì)胞核周圍，呈條索狀棕黃色染色（平均光密度值 0.2144±0.0431）。在胃癌組織中，MUC1分布極性喪失，著色部位呈彌漫均勻棕黃色染色，主要位于胞漿和胞膜的近腺腔面，較正常胃粘膜染色加深（平均光密度值 0.3225±0.0

6、171）。MUC1的表達(dá)程度與患者有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小、腫瘤的TNM分期密切相關(guān)(p<0.05)，而與患者年齡、病理類型、腫瘤浸潤(rùn)深度、腫瘤部位等則無(wú)明顯關(guān)系(p＞0.05)。（3）MUC1在HER2陽(yáng)性和HER2陰性胃癌組織中的表達(dá)程度無(wú)顯著差異（p＞0.05）。
　　 結(jié)論：胃癌組織中HER2陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)深度、腫瘤部位及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，MUC1的過(guò)表達(dá)及分布異常則與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小、TNM分期密切相關(guān)；而兩

7、者在胃癌組織上的表達(dá)沒(méi)有明顯的相關(guān)性。提示兩者均是影響胃癌發(fā)生發(fā)展的重要因素，但在胃癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，兩者可能是相互獨(dú)立的作用因子或分子靶點(diǎn)。
　　 第二章兩種胃癌細(xì)胞株對(duì)曲妥株單抗的敏感性差異及其與MUC1表達(dá)的關(guān)系
　　 目的：探討兩種胃癌細(xì)胞株對(duì)曲妥株單抗的敏感性差異及其與MUC1表達(dá)差異之關(guān)系。
　　 方法：應(yīng)用不同濃度曲妥株單抗分別作用于胃癌細(xì)胞MKN45和NCI-N87，應(yīng)用CCK8（Cell Cou

8、nting Kit-8）法檢測(cè)兩種不同胃癌細(xì)胞株對(duì)曲妥株單抗的敏感性；應(yīng)用real-time PCR和Western blot法觀察對(duì)曲妥株單抗敏感性不同的兩種胃癌細(xì)胞株中HER2和MUC1的mRNA及蛋白表達(dá)情況。
　　 結(jié)果： (1)不同濃度曲妥株單抗（0.01ug/ml、0.1 ug/ml、1 ug/ml、10 ug/ml、100 ug/ml、1000 ug/ml）處理胃癌細(xì)胞MKN45、NCI-N87 24、48和72小

9、時(shí)后，對(duì)NCI-N87的生長(zhǎng)抑制顯著高于MKN45。(2)胃癌細(xì)胞株MKN45和NCI-N87間HER2的mRNA及蛋白表達(dá)水平比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）。而MKN45的MUC1的mRNA表達(dá)及蛋白水平顯著高于NCI-N87細(xì)胞株（p<0.05）。
　　 結(jié)論v兩種胃癌細(xì)胞株HER2均為高表達(dá)，NCI-N87對(duì)曲妥株單抗敏感，而MKN45對(duì)曲妥株單抗耐藥；耐藥的胃癌細(xì)胞MKN45中MUC1的mRNA及蛋白表達(dá)水平均顯著高于

10、敏感的NCI-N87細(xì)胞。提示MUC1的過(guò)表達(dá)可能與胃癌細(xì)胞對(duì)曲妥株單抗耐藥有關(guān)。
　　 第三章 siRNA沉默MUC1基因?qū)ξ赴┘?xì)胞曲妥株單抗耐藥的影響
　　 目的：通過(guò)沉默MUC1高表達(dá)的胃癌細(xì)胞株MKN45中MUC1的表達(dá)，觀察對(duì)其曲妥株單抗敏感性的影響，探討MUC1過(guò)表達(dá)與胃癌細(xì)胞曲妥株單抗耐藥的相關(guān)性。
　　 方法：（1）采用siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)特異性“沉默”MKN45中MUC1基因的表達(dá)；（2）分別用r

11、eal-time PCR和Western blot檢測(cè)MUC1-siRNA轉(zhuǎn)染前后胃癌細(xì)胞中MUC1的mRNA及蛋白水平的表達(dá)；（3）CCK-8法檢測(cè)MUC1沉默前后MKN45對(duì)曲妥株單抗的敏感性變化。
　　 結(jié)果：（1）經(jīng)過(guò)MUC1-siRNA轉(zhuǎn)染后，胃癌細(xì)胞MKN45中MUC1的 mRNA轉(zhuǎn)錄水平被特異性的“沉默”，蛋白表達(dá)水平顯著下降；（2）不同濃度曲妥株單抗（0.01ug/ml、0.1 ug/ml、1 ug/ml、10