小鼠H22肝癌細胞肺高轉(zhuǎn)移株的建立及其生物學特性的測定和RhoC基因的表達.pdf

1、目的:建立小鼠H22肝癌細胞肺高轉(zhuǎn)移細胞株并測定其相關(guān)生物學特性和RhoC基因的表達，為研究轉(zhuǎn)移相關(guān)分子機制提供經(jīng)濟實用的模型。
　　 方法:將小鼠H22肝癌細胞(簡稱為M0)接種于小鼠腹腔形成腹水瘤，取腹水瘤細胞經(jīng)尾靜脈注射，待其肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)形成后，取其肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)處肝癌細胞再次腹腔接種、形成腹水瘤，再尾靜脈注射，反復進行此操作后獲得第四代肺高轉(zhuǎn)移肝癌細胞(簡稱為M4)。檢測M4在昆明小鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)移能力、體外細胞增殖能力、計算細胞倍

2、增時間、計數(shù)細胞分裂指數(shù)、Giemsa染色觀察其染色體形態(tài)、用流式細胞儀檢測細胞周期分布，并與M0比較。應用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法測定M4細胞RhoC基因mRNA的表達水平，并應用Imagequant軟件進行比較分析。
　　 結(jié)果:肺高轉(zhuǎn)移H22細胞M4與M0相比較，尾靜脈注射后在第30天和40天，M4肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)總體積明顯大于M0；M0與M4細胞體外培養(yǎng)24h、36h、48h、60h及72h，P值均小于0.05，

3、范圍從3×10-9至7.2×10-26，M4細胞濃度明顯高于M0；M0細胞倍增時間為71.98h，而M4細胞倍增時間縮短縮短為44.10h；M4細胞分裂指數(shù)大于M0(P=0.014)；M4細胞周期G0/G1期比例較M0減少(P=0.024)，S期比例增多(P=0.022)；染色體數(shù)目無差異，但高轉(zhuǎn)移H22細胞染色體存在明顯異型性。高轉(zhuǎn)移細胞RhoC基因mRNA的表達高于M0細胞，M0細胞RhoC基因與GAPDH基因表達比值為0.486±