rBTI體內(nèi)外誘導(dǎo)小鼠肝癌細(xì)胞株H22的凋亡研究.pdf

1、細(xì)胞凋亡是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主有序的死亡。它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等作用;它并不是病理?xiàng)l件下自體損傷的一種現(xiàn)象，而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動(dòng)爭(zhēng)取的一種井然有序的死亡過程。這種自毀性的過程通常由caspase-3作為主要的執(zhí)行者使caspase系列級(jí)聯(lián)放大而實(shí)現(xiàn)。目前在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中有關(guān)細(xì)胞凋亡的途徑主要有兩種:線粒體途徑和死亡受體途徑。前者，凋亡信號(hào)激發(fā)了細(xì)胞色素c從線粒體間隙釋放到細(xì)胞質(zhì)中，形成了Ap

2、af-1和dATP復(fù)合物，進(jìn)而可增強(qiáng)caspase-3的活性，最終啟動(dòng)一系列的凋亡事件并使細(xì)胞死亡。外源性途徑開始于一個(gè)死亡受體，如Fas等。當(dāng)Fas配體與Fas死亡受體結(jié)合時(shí)，結(jié)合的大分子與另一個(gè)受體結(jié)合，進(jìn)而介導(dǎo)凋亡。
　　本文目的是研究重組蕎麥胰蛋白酶抑制劑(rBTI)抑制癌細(xì)胞增殖的作用及其機(jī)制。采用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，以肝癌細(xì)胞系H22為靶細(xì)胞，以不同濃度的rBTI體外處理細(xì)胞不同時(shí)間后，采用MTT檢測(cè)、DNA電泳分析、細(xì)胞核

3、形態(tài)學(xué)觀察、細(xì)胞色素c檢測(cè)、caspase活性檢測(cè)等方法測(cè)定rBTI在體外誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞H22凋亡的作用。結(jié)果顯示rBTI能夠在體外特異性的抑制H22細(xì)胞的生長(zhǎng)，誘導(dǎo)H22細(xì)胞凋亡，且隨著rBTI濃度及作用時(shí)間的增加，呈現(xiàn)劑量和時(shí)間依賴性效應(yīng)，但對(duì)正常人肝細(xì)胞7702沒有影響。
　　為了研究在體內(nèi)rBTI是否具有同樣的效果以及屬于細(xì)胞凋亡的哪條途徑，我們?cè)谛◇w鼠內(nèi)進(jìn)行了rBTI對(duì)H22肝癌細(xì)胞株增殖影響的研究。通過小鼠體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)

4、，初步研究考察rBTI體內(nèi)的抗腫瘤活性，證明在經(jīng)rBTI治療后的小鼠體內(nèi)的腹水瘤得到抑制，同時(shí)rBTI能夠明顯的抑制移植性實(shí)體瘤的形成。機(jī)理研究初步表明，經(jīng)rBTI處理的細(xì)胞可導(dǎo)致細(xì)胞色素c從線粒體釋放到細(xì)胞質(zhì)中，并能增強(qiáng)caspase-3，8，9的活性。結(jié)論，rBTI能特異性地誘導(dǎo)H22細(xì)胞凋亡，并能有效的抑制H22腹水瘤和移植性實(shí)體瘤的形成，其機(jī)制與caspase-3依賴性凋亡調(diào)節(jié)信號(hào)通路有關(guān)。在rBTI的發(fā)酵條件研究中，應(yīng)用搖瓶試