人外周血單個核細胞轉分化的探討.pdf

1、本研究包含以下幾部分： 第一部分大鼠視網膜前體細胞體外培養(yǎng)生長情況的觀察 目的：分離培養(yǎng)新生兩天的SD乳大鼠視網膜組織，觀察其生長情況和分化潛能，為外周血單個核細胞轉分化探討奠定基礎。 方法：選取新生兩天的SD乳大鼠5只共10只眼，分離視網膜組織并用神經干細胞培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，連續(xù)7d。倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并照相記錄其形態(tài)變化。 結論：體外培養(yǎng)的新生兩天SD乳大鼠視網膜組織具備良好的生長能力和多向

2、分化潛能。 第二部分成人外周血單個核細胞的分離和體外轉分化的探討 目的：探討成人外周血單個核細胞轉分化的可能性。 方法：用人淋巴細胞分離液分離人外周血單個核細胞。用神經干細胞培養(yǎng)液（Ⅰ組）和視網膜條件誘導液（Ⅱ組）進行體外連續(xù)培養(yǎng)5d；用倒置顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡及免疫熒光技術觀察細胞的形態(tài)，用流式細胞技術檢測其表面標志的變化，最后進行統(tǒng)計學分析。 結論：人外周血單個核細胞經一定條件的培養(yǎng)，在體外可被誘

3、導而轉分化，表達神經前體細胞和視網膜細胞的一些特異性標記。 第三部分急性高眼壓對裸小鼠視網膜神經節(jié)細胞的影響 目的：觀察玻璃體腔注射制作的急性高眼壓對裸小鼠視網膜神經節(jié)細胞的影響。建立一種簡單的制作裸小鼠視神經損傷模型的方法，為人外周血單個核細胞體內轉分化和修復損傷的研究奠定基礎。 方法：對裸小鼠進行單眼玻璃體腔注射，每眼10ul生理鹽水。于注射后第1d、3d、5d、7d、14d、30d和60d處死動物，取眼球進

4、行HE染色，光學顯微鏡下觀察并照相。對比不同時間點視網膜神經節(jié)細胞的形態(tài)學變化。 結論：玻璃體腔注射一定量的生理鹽水所致的急性高眼壓能夠損傷視網膜神經節(jié)細胞。 第四部分誘導培養(yǎng)后成人外周血單個核細胞裸小鼠體內遷移情況的觀察 目的：初步觀察經體外誘導培養(yǎng)5d的人外周血單個核細胞在T淋巴細胞缺陷動物（裸小鼠）體內遷移和與視網膜整合的情況。 方法：玻璃體腔注射組：裸小鼠行單眼玻璃體腔注射5ul細胞濃度為5×10

5、6/ml Dil標記的經體外誘導培養(yǎng)的單個核細胞懸液；腹腔注射組：裸小鼠行單眼玻璃體腔注射10ul生理鹽水制作急性高眼壓模型，同時腹腔注射Dil標記的經體外誘導培養(yǎng)的單個核細胞，每只鼠約為1×106個細胞。兩組裸小鼠都在注射細胞后30d進行處死，取注射眼和主要臟器進行冰凍切片、普通病理切片、HE染色和Hotchest染片，普通光學顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡觀察細胞在體內和眼內移行和整合的情況。 結果：HE染色發(fā)現(xiàn)兩個實驗組視網膜前