小鼠卵泡發(fā)育過程中miRNA-383和MiRNA-320的功能研究.pdf

1、我們之前的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在TGF-β1刺激小鼠卵巢顆粒細胞(GC)中，microRNA-383(miR-383)和microRNA-320(miR-320)是兩個下調(diào)比較明顯的microRNAs。但是在卵泡發(fā)育的過程中，miR-383和miR-320在顆粒細胞中的功能和作用機制還不清楚，在本文的第一個研究中miR-383主要表達在小鼠不同發(fā)育階段的卵泡的顆粒細胞和卵母細胞中。在顆粒細胞中過表達miR-383后能夠通過結(jié)合RNA結(jié)合基序，單

2、鏈結(jié)合蛋白1（RBMS1）3'UTR促進雌激素的分泌。miR-383通過影響RBMS1 mRNA的穩(wěn)定性來抑制其表達。從而又影響c-Myc（RBMS1的一個下游基因）的表達。過表達RBMS1和c-Myc能夠抑制miR-383促進激素生成的效應(yīng)。在顆粒細胞中降低類固醇生成因子1(SF-1)的表達顯著地抑制Sarcoglycanzeta(SGCZ)(miR-383宿主基因)，miR-383的初級轉(zhuǎn)錄物和成熟體的表達，這說明miR-383被S

3、F-1轉(zhuǎn)錄激活。熒光素酶報告基因和染色體免疫共沉淀技術(shù)檢測顯示SF-1特異的結(jié)合在SGCZ的啟動子區(qū)而且可以激活miR-383和SGCZ的表達。另外SF-1參與miR-383，RBMS1和c-Myc介導(dǎo)的顆粒細胞雌激素的分泌。這些結(jié)果表明miR-383通過靶向RBMS1或部分使c-Myc失活來促進雌激素的生成。在顆粒細胞中SF-1促進miR-383的轉(zhuǎn)錄和功能。
　　 在21天小鼠卵巢中，miR-320的表達隨著PMSG處理時間

4、的增加而顯著降低。miR-320主要表達于各級卵泡的顆粒細胞和卵母細胞中，miR-320的表達與卵巢的發(fā)育呈負相關(guān)。FSH刺激顆粒細胞后，miR-320的表達隨著時間和劑量的增加顯著下調(diào)。在顆粒細胞中miR-320通過靶向SF-1和E2F1可以顯著抑制顆粒細胞增殖和雌激素的生成。過表達和沉默SF-1和E2F1的表達能夠回復(fù)和增強miR-320介導(dǎo)的顆粒細胞增殖和雌激素的分泌。在不同發(fā)育時期和PMSG處理的小鼠卵巢中，miR-320的表達

5、與SF-1/E2F1的表達呈負相關(guān)。以上結(jié)果說明miR-320通過靶基因SF-1和E2F1調(diào)控顆粒細胞增殖和激素分泌功能。卵巢囊內(nèi)注射miR-320慢病毒顯著促進血清中睪酮和孕酮的分泌而抑制雌激素的分泌。這些數(shù)據(jù)表明miR-320在小鼠卵泡發(fā)育過程中發(fā)揮著重要作用。
　　 綜合以上研究，在卵泡的發(fā)育過程中，miRNA-383和miRNA-320通過不同的靶基因來調(diào)控小鼠顆粒細胞的增殖和激素分泌。對miRNAs的生成調(diào)控和功能的研