CCR8在結腸癌中的表達及其對結腸癌細胞生物學行為的影響.pdf

1、本文分三個部分進行探討：
　　第一部分：結腸癌中CCR8的表達及臨床意義
　　目的：檢測結腸癌組織及結腸癌細胞株中趨化因子受體CCR8的表達，并探討其臨床意義。
　　方法：采用免疫組織化學方法檢測70例結腸癌以及癌旁正常組織中CCR8的表達，采用免疫印跡和流式細胞術檢測6株結腸癌細胞株中CCR8的表達。分析結腸癌中CCR8的表達與臨床病理特征的關系。
　　結果：免疫組織化學顯示在70例結腸癌組織中，CCR8陽性表

2、達率為47.1％（33/70），癌旁正常組織基本不表達CCR8，腸系膜淋巴結中可見趨化因子CCL1表達。結腸癌中CCR8的表達與腫瘤的局部侵犯深度、淋巴結轉移和臨床分期相關（p＜0.01），而與患者年齡、性別、腫瘤體積和分化程度不相關（p＞0.05）。CCR8在6株結腸癌細胞株中均有表達，其中SW480細胞株表達相對較高。
　　結論：CCR8在部分結腸癌組織中表達，并與結腸癌的局部侵犯、淋巴轉移和臨床分期相關，提示其可能參與了結腸

3、癌侵襲和轉移的過程。結腸癌細胞株 SW480可用于進一步研究。
　　第二部分：CCL1/CCR8對結腸癌SW480細胞胞內(nèi)鈣動員、增殖、凋亡和遷移的影響
　　目的：研究趨化因子CCL1及其受體CCR8對結腸癌細胞株SW480胞內(nèi)鈣動員、體外增殖、凋亡和遷移能力的影響。
　　方法：采用鈣離子探針Fluo-3結合流式細胞術，檢測CCL1作用于SW480細胞表面的CCR8所引起的胞內(nèi)鈣離子濃度變化。MTT增殖實驗、Annex

4、in V/PI檢測細胞凋亡和Transwell腫瘤細胞遷移試驗檢測CCL1對SW480細胞增殖、凋亡和遷移能力的影響。
　　結果：CCL1能夠引起SW480細胞內(nèi)鈣離子濃度的升高，且這一效應能夠被CCR8拮抗劑MC148所阻斷。不同濃度的CCL1作用于SW480細胞24h、48h或72h后并不影響其增殖能力。100ng/ml CCL1或100ng/ml MC148不會促進或抑制5-FU對SW480細胞的凋亡作用。10ng/ml-1

5、00ng/ml CCL1能夠增強SW480細胞的遷移能力，并呈現(xiàn)濃度依賴性，其作用依賴于CCL1的濃度梯度，并能被MC148所阻斷。
　　結論：SW480細胞表面表達的CCR8具有生物學活性。CCL1作用于CCR8能夠明顯增強SW480細胞的體外遷移能力，但不影響SW480細胞的增殖和抗凋亡能力。
　　第三部分：CCL1/CCR8對結腸癌SW480細胞侵襲和轉移相關因子表達的影響
　　目的：研究趨化因子CCL1及其受體

6、CCR8對結腸癌細胞株SW480侵襲能力和基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP2）、基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）、E-鈣粘蛋白（E-cadherin）和血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）表達的影響。
　　方法：采用人工基質(zhì)膠Matrigel結合Transwell小室構建體外侵襲模型，研究CCL1對SW480細胞侵襲能力的影響。用實時熒光定量聚合酶鏈式反應（Real-Time PCR）和免疫印跡檢測CCL1對SW480細胞表達MMP2、MMP9、E-

7、cadherin和VEGF的影響。
　　結果：CCL1能夠明顯增強SW480細胞的體外侵襲能力，且這一效應能夠被CCR8拮抗劑MC148所阻斷。100ng/ml CCL1作用于SW480細胞12h后能夠顯著上調(diào)MMP2 mRNA和蛋白的表達，并顯著下調(diào) E-cadherin mRNA和蛋白的表達，且其效應能被MC148所阻斷。100ng/ml CCL1或MC148作用12h后，SW480細胞中MMP9和VEGF的mRNA和蛋白表達