質(zhì)譜法與直接測序法檢測HBV P基因耐藥突變的比較研究.pdf

1、目的：用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜法(MALDI-TOF MS)和PCR產(chǎn)物直接測序法兩種方法檢測乙型肝炎病毒P基因耐藥位點(diǎn)的突變情況，并進(jìn)行比較分析，進(jìn)一步證實(shí)MALDI-TOF MS是一種快速、早期、準(zhǔn)確發(fā)現(xiàn)核苷（酸）類藥物治療后耐藥位點(diǎn)的檢測方法。
　　 方法：⑴收集90例服用拉米夫定等核苷（酸）類藥物治療1年以上，HBV-DNA仍大于500 copies/ml的慢性乙型病毒性肝炎患者血清，并根據(jù)核苷（酸）類藥物用藥

2、情況分為6個組；同時收集10名HBsAg陽性時間超過6個月，肝功能正常，HBV-DNA＞1×105 copies/ml，始終未予抗病毒治療的慢性乙型病毒性肝炎患者的血清作為對照組。⑵采用MALDI-TOF MS檢測HBV P基因已知11個變異位點(diǎn)的變異情況；基于SEQUENON公司質(zhì)譜儀及配套芯片-試劑盒技術(shù)，通過TYPE4.0軟件分析結(jié)果；PCR產(chǎn)物直接測序法采用ABI3730XL測序儀，通過SequenceNavigator軟件分析

3、得出序列。
　　 結(jié)果：①兩種方法檢出結(jié)果比較：在服用拉米夫定等核苷（酸）類藥物的90例病例血清中，MALDI-TOF MS測得53例耐藥變異的病例，共86個耐藥突變位點(diǎn)，PCR產(chǎn)物直接測序法僅檢測出19例耐藥變異的病例，共29個耐藥突變位點(diǎn)，MALDI-TOF MS檢出數(shù)明顯高于直接測序法，兩者間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；在對照組中兩種檢測方法均沒有發(fā)現(xiàn)已知的耐藥變異位點(diǎn)。②兩種方法檢測DNA的靈敏性比較：HBV-D

4、NA水平在500-1000 copies/ml的12例血清中，MALDI-TOF MS測得6例出現(xiàn)耐藥變異位點(diǎn)，檢出率50％，而PCR產(chǎn)物直接測序法在此病毒水平下未檢出耐藥變異位點(diǎn)；在相同的HBV-DNA水平下，MALDI-TOF MS變異檢出數(shù)（率）均高于PCR產(chǎn)物直接測序法，兩者間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。③MALDI-TOF MS檢測準(zhǔn)確性的結(jié)果分析：MALDI-TOF MS檢測結(jié)果中，所用藥物與拉米夫定耐藥位點(diǎn)相關(guān)的5

5、組中，檢測到的變異位點(diǎn)與該藥物已知的常見變異位點(diǎn)完全相符，相符率100％；單用阿德福韋酯組檢出的變異位點(diǎn)與該藥物已知的常見變異位點(diǎn)只部分相符，相符率70％。
　　 結(jié)論：⑴MALDI-TOF MS對已知耐藥位點(diǎn)的檢出數(shù)（率）高于PCR產(chǎn)物直接測序法；⑵MALDI-TOF MS對已知耐藥位點(diǎn)的檢出的DNA靈敏性高于PCR產(chǎn)物直接測序法。⑶MALDI-TOF MS準(zhǔn)確性高，檢測到已知耐藥位點(diǎn)和實(shí)際用藥耐藥位點(diǎn)的相符率高。⑷MALDI