乙型肝炎治療耐藥基因突變的焦磷酸測(cè)序診斷技術(shù)研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目前檢測(cè)乙肝病毒耐藥突變的方法主要有直接測(cè)序法、線性探針?lè)治龇?、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析及基因芯片等技術(shù)。上述方法都是基于PCR基礎(chǔ)上的操作,且只有YMDD耐藥突變的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用于臨床進(jìn)行定性檢測(cè),尚無(wú)比較全面和滿意的針對(duì)多種耐藥基因突變定性和定量檢測(cè)變異株的方法。
  焦磷酸測(cè)序技術(shù)具有準(zhǔn)確率高,靈活性大,重復(fù)性強(qiáng),操作簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì),已經(jīng)廣泛應(yīng)用于多個(gè)研究領(lǐng)域,尤在SNP分析方面有較大的技術(shù)優(yōu)勢(shì)。借助焦磷酸測(cè)序技

2、術(shù)的發(fā)展,建立焦磷酸測(cè)序技術(shù)檢測(cè)拉米夫定和阿德福韋酯治療乙肝所致乙肝病毒基因耐藥突變的定量檢測(cè)方法,為臨床乙肝耐藥診斷和治療提供依據(jù)。
  針對(duì)乙肝病毒DNA聚合酶基因序列上4個(gè)常見基因突變位點(diǎn)的6種突變形式,分別克隆構(gòu)建野生型和突變型質(zhì)粒作為標(biāo)準(zhǔn)品,應(yīng)用生物信息學(xué)手段設(shè)計(jì)目標(biāo)基因通用PCR引物和各突變點(diǎn)的焦磷酸測(cè)序引物,建立焦磷酸測(cè)序的突變檢測(cè)方法。對(duì)接受拉米夫定、阿德福韋酯治療的慢性乙型肝炎患者血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。
  構(gòu)

3、建了乙肝病毒四種常見耐藥性突變的標(biāo)準(zhǔn)株和變異株克隆,建立了分別或同時(shí)檢測(cè)拉米夫定、阿德福韋酯耐藥突變的焦磷酸測(cè)序方法,對(duì)72例臨床耐藥或疑似耐藥的患者血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),雙脫氧測(cè)序驗(yàn)證,檢出拉米夫定耐藥突變32例,阿德福韋酯耐藥突變5例,其中焦磷酸測(cè)序檢出20例為混合突變,而雙脫氧測(cè)序顯示為6例。
  結(jié)合臨床資料進(jìn)行分析,拉米夫定治療組耐藥突變率與LokAS的研究結(jié)果一致,數(shù)據(jù)顯示拉米夫定治療組耐藥發(fā)生率較高,一年期耐藥發(fā)生率為2

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