前列腺癌細胞結合單鏈抗體的篩選、表達純化及其功能初步研究.pdf

1、本研究旨在篩選出與人前列腺癌細胞結合特異性較高的抗體，以期有助于前列腺癌的早期診斷與低損傷性治療。 首先用人前列腺癌細胞PC3、C4-2、DU145的膜蛋白混合物免疫BALB/c小鼠，從免疫鼠脾細胞中提取總RNA，通過RT-PCR構建出組合單鏈抗體cDNA文庫，通過噬菌體表面呈現(xiàn)，用人前列腺癌細胞PC3對噬菌體-單鏈抗體庫(phage-scFv)進行親和富集及phage-ELISA篩選鑒定，獲得一種與人前列腺癌細胞系PC3結合特

2、異性較高的單鏈抗體scFvP-9，其與PC3最小結合滴度與對照細胞LNCaP最小結合滴度相比低150多倍，說明其與PC3細胞具有較強的結合特性。經(jīng)序列測定及與鼠抗體可變區(qū)序列庫進行同源性比較，確定其VH屬于鼠抗體重鏈可變區(qū)基因家族Ⅲ(C)亞組；其VL屬于鼠抗體κ輕鏈可變區(qū)基因家族ⅣV組。且未發(fā)現(xiàn)任何已知單鏈抗體與之序列相同。 將scFvP-9插入pTIG-Trx載體，單鏈抗體在大腸桿菌BL21(DE3)中得到可溶性表達，ELIS

3、A檢測表明誘導后在BL21(DE3)胞漿中的單鏈抗體可與PC3細胞有效結合。 利用MTT比色實驗初步研究了scFvP-9對多種腫瘤細胞及正常肝細胞HL02的生物作用：scFvP-9不影響HL02細胞及惡性程度低的人前列腺癌細胞LNCaP的生長，但對人前列腺癌細胞PC3、人宮頸癌細胞HeLa、人肺癌細胞PLA801D細胞均有生長抑制作用；且孵育時間為24h時抑制細胞生長增殖的作用最突出。 在人宮頸癌裸鼠荷瘤模型體內驗證了s

4、cFvP-9的抑瘤作用。PBS組宮頸癌移植瘤呈持續(xù)生長，scFvP-9處理組移植瘤生長受到明顯抑制，尤其是瘤周皮下給藥組更為顯著，而非相關抗體處理組情況類似于PBS組。病理切片結果顯示，scFvP-9處理組的腫瘤組織與PBS組相比，包膜完整、界限清晰，并有大片組織壞死；而非相關抗體組未見此現(xiàn)象。說明scFvP-9具有較好的抑瘤作用。 本研究獲得的與人前列腺癌細胞系PC3結合特異性較高的單鏈抗體為前列腺癌的早期診斷與靶向治療打下基