MiR-101調(diào)控前列腺癌細(xì)胞CRMP4的表達(dá)及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：
　　探討miR-101、EZH2及CRMP4在前列腺癌細(xì)胞中表達(dá)的相關(guān)性；分析前列腺癌中miR-101是否通過(guò)EZH2調(diào)控CRMP4基因啟動(dòng)子組蛋白修飾以調(diào)控CRMP4基因的表達(dá)，以進(jìn)一步闡明CRMP4的表觀遺傳學(xué)調(diào)控機(jī)制。
　　方法：
　　使用Lipofectamine2000分別將pre-miRNA-101、陰性對(duì)照pre-miRNA negative control，siRNA EZH2，陰性對(duì)照siRN

2、A negative control、陽(yáng)性對(duì)照siRNA MAPK-1轉(zhuǎn)染入PC3細(xì)胞中。應(yīng)用熒光顯微鏡觀察各組細(xì)胞熒光亮度及比例。運(yùn)用real-time RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，以及CRMP4、EZH2mRNA表達(dá)量。
　　使用可抑制EZH2表達(dá)及其組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶活性的3-Deazaneplanocin A(DZNEP)處理PC3細(xì)胞作為對(duì)照；運(yùn)用Western Blot檢測(cè)EZH2、CRMP4及H3K27me3、uH2AK

3、119、H3AC在轉(zhuǎn)染及DZNEP處理前后表達(dá)的改變。
　　結(jié)果：
　　轉(zhuǎn)染6h后，除空白對(duì)照組外，各組細(xì)胞熒光明亮，約有85％細(xì)胞具有熒光。轉(zhuǎn)染48h后real-time RT—PCR顯示，pre-miRNA-101組：miR-101、CRMP4 mRNA表達(dá)顯著上調(diào)，EZH2 mRNA表達(dá)顯著下調(diào)。pre-miRNA-101組及siRNA EZH2組；CRMP4mRNA表達(dá)顯著上調(diào)，EZH2 mRNA表達(dá)顯著下調(diào)；轉(zhuǎn)染7

4、2h后，pre-miRNA-101組、siRNA EZH2組、DZNep處理組：CRMP4、H3AC蛋白表達(dá)顯著上調(diào)，EZH2蛋白、組蛋白H3K27me3、uH2AK119蛋白表達(dá)顯著下調(diào)、陰性對(duì)照組中的各蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　miR-101可能通過(guò)下調(diào)EZH2的表達(dá)，進(jìn)而下調(diào)與CRMP4基因轉(zhuǎn)錄相關(guān)的組蛋白H3K27me3、uH2AK119，上調(diào)組蛋白H3Ac，繼而上調(diào)CRMP4表達(dá)，從而抑制前列腺癌