鱖魚(yú)嗜水氣單胞菌亞單位疫苗的研究.pdf

1、上海水產(chǎn)大學(xué)碩士學(xué)位論文鱖魚(yú)嗜水氣單胞菌亞單位疫苗的研究姓名：潘厚軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：水產(chǎn)養(yǎng)殖指導(dǎo)教師：吳淑勤;楊先樂(lè)2003.5.20潘厚軍 上海水產(chǎn)大學(xué)碩士學(xué)位論文 中文摘要檢測(cè)擴(kuò)增出A h 的特異性的毒力基因一氣溶素基因( a e r A ) 2 0 9 b p 片段，進(jìn)一步證實(shí)為嗜水氣單胞菌。此株細(xì)菌免疫兔的抗血清效價(jià)較高，免疫原性好。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明G Y K l 是一株毒力和溶血性均較強(qiáng)、免疫原性好的嗜水氣單胞菌，因而被選

2、為亞單位疫苗研制用菌株。2 ．胞外產(chǎn)物( E C P ) 和脂多糖( L P S ) 的提取及分析采用高速離心、硫酸銨鹽析、透析等生物化學(xué)制備技術(shù)提取了鱖魚(yú)致病性嗜水氣單胞菌G Y K l 株的粗胞外產(chǎn)物；粗胞外產(chǎn)物經(jīng)H i p r e pT M 1 6 ／1 0Q X L 離子交換層析，H i p r e p S e p h a c r y lS - 2 0 0 聚丙烯酰胺葡聚糖層析得到具有生物活性的組分；S D S ．P A G E

3、 電泳顯示粗胞外產(chǎn)物具有多條蛋白條帶，粗胞外產(chǎn)物的主帶和經(jīng)離子交換層析和聚丙烯酰胺葡聚糖層析收集的紫外吸收主峰的分子量為3 5 K d a 。粗胞外產(chǎn)物具有溶解鱖、加洲鱸、銀鯽、小鼠、新西蘭兔、綿羊、人0 型血等的紅細(xì)胞活性；腹腔注射，可致死鱖、銀鯽和小白鼠。采用W e s t p h a l 等( 1 9 6 5 ) 的溫酚法從菌體提取T I I 多糖( L P S ) ，脂多糖的S D S ．P A G E 電泳特性與S u s a

4、 n aM e r i n o 等( 1 9 9 2 ) 2 0 。C 培養(yǎng)提取的血清型0 ：3 4 的A h 脂多糖形狀相似。1 ．O m g 的粗脂多糖腹腔注射小鼠，實(shí)驗(yàn)小鼠活動(dòng)和攝食減弱。G Y K l 株粗胞外產(chǎn)物和脂多糖與其他研究者提取的A h 菌株有共性，可作為目標(biāo)成分研制亞單位疫苗。粗胞外產(chǎn)物有毒性，在制作疫苗時(shí)需滅活處理；而粗脂多糖對(duì)實(shí)驗(yàn)魚(yú)安全性好，不需滅活。3 ．粗胞外產(chǎn)物和粗脂多糖疫苗免疫鱖魚(yú)的效果鱖魚(yú)注射和浸泡接種