嗜水氣單胞菌的分離鑒定及控制方法研究.pdf

1、嗜水氣單胞菌感染的主要對象是水產(chǎn)動物性食品，隨著人們對水產(chǎn)品消費量的不斷增加，其作為致病微生物的地位已被確定，并且日益成為的當(dāng)前水產(chǎn)品質(zhì)量與衛(wèi)生安全關(guān)注的重要對象。本文對病死魚體內(nèi)嗜水氣單胞菌的分離鑒定及其控制方法進行了研究，主要結(jié)果如下：
　　1)嗜水氣單胞菌的分離鑒定。本實驗從自然發(fā)病的出血性敗血癥異育銀鯽體內(nèi)分離得到20株致病菌，經(jīng)人工回歸感染實驗證明其具有較大的毒力，在此基礎(chǔ)上分析了菌株的生理生化特性，研究了其藥敏特性，并

2、通過對典型菌株L1的16S rRNA序列分析構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，以期豐富異育銀鯽出血性敗血癥致病菌的病原生物學(xué)特性，為異育銀鯽細(xì)菌性病害的有效防治提供科學(xué)理論依據(jù)。
　　2)嗜水氣單胞菌滅活疫苗的制備。選取嗜水氣單胞菌菌株L1為疫苗制作的出發(fā)菌株，測定嗜水氣單胞菌的OD值和生長曲線，并通過正交實驗確定了嗜水氣單胞菌L1的最適培養(yǎng)條件為：蛋白胨10g/L，酵母膏15g/L，蔗糖7g/L，K2HPO44.56g/L，同時通過優(yōu)化得出制作滅

3、活疫苗的條件為：滅活溫度28℃，甲醛終濃度0.2%，滅活時間36h。研究結(jié)果表明，滅活疫苗的安全性較高，且采用注射接種方式對草魚的免疫保護率高達(dá)90%。
　　3)滅活疫苗對異育銀鯽敗血癥血液和生化指標(biāo)的影響研究。為研究滅活疫苗對嗜水氣單胞菌感染后的異育銀鯽的血液和生化指標(biāo)的影響，將異育銀鯽隨機分為對照組、感染組和免疫組，在處理后18h和36h時斷尾采血，分離得到抗凝血和血清，分別測定8項血液指標(biāo)和13項與免疫相關(guān)的生化指標(biāo)。處理后

4、18h，感染組與對照組相比，谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、Cl-差異顯著(P<0.05)，其他指標(biāo)無顯著差異(p>0.05)，而免疫組與對照組之間均無差異；處理后36h，感染組9項指標(biāo)(MCH、MCHC、WBC、RBC、Cl-、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、糖)出現(xiàn)極顯著差異(p<0.01)，8項指標(biāo)(MCV、HGB、HCT、總蛋白、總膽紅素、白蛋白、肌酐、尿酸)差異顯著(p<0.05)，免疫組指標(biāo)除WBC顯著高于對照組(p<0.05)

5、，其他指標(biāo)均無顯著差異(p>0.05)。結(jié)果表明，滅活疫苗能夠?qū)︳~體產(chǎn)生較強的免疫保護力，有助于減輕致病菌對魚體的損害程度，增強了魚體的免疫抵抗力。
　　4)銀鯽魚腸道中益生菌菌株的篩選與血液生化影響分析。通過平板涂布法從健康的銀鯽腸道中分離純化到60株菌株，以嗜水氣單胞菌為指示菌，點種法初篩得到12株菌株，再通過牛津杯實驗篩選出4株對嗜水氣單胞菌有明顯抑制作用(抑菌圈直徑在14mm以上)的益生菌疑似株，并進行了耐熱試驗、耐酸試驗

6、和人工腸液耐受試驗，篩選出最符合益生菌功能特性的菌株YJ-9。該菌株在90℃高溫水浴30 min后相對存活率為1.51%，在pH為3的液體培養(yǎng)基中4h內(nèi)相對存活率為8.37%，活菌數(shù)都保持在106 CFU/mL以上，并且可以在人工模擬腸液中緩慢生長。在急性毒力實驗中，10倍于實驗劑量的菌株YJ-9對銀鯽無毒，動物保護實驗證明菌株YJ-9能有效增強銀鯽對嗜水氣單胞菌的免疫抵抗力，相對保護率達(dá)到80%。研究結(jié)果表明，菌株YJ-9可以作為一個