煙草青枯病菌的分子檢測(cè)與煙草品種抗病性研究.pdf

1、煙草青枯病是是由青枯勞爾氏菌（Ralstonia solanacearum E.F.Smith）引起的以土壤傳播為主的細(xì)菌病害，該病分布范圍廣、危害大，成為煙草生產(chǎn)上的一大毀滅性病害，給煙草生產(chǎn)帶來(lái)巨大損失。煙草青枯病是典型的維管束病害，病菌多從根部侵入，根、莖、葉各部均可受害，最典型癥狀是枯萎，在田間，青枯病常常與煙草黑脛病、根結(jié)線蟲病等病害混合發(fā)生，使為害更加嚴(yán)重。在防治青枯病的為害方面，目前生產(chǎn)上主要采用農(nóng)業(yè)防治、藥劑防治和生物防

2、治的方法，但效果均不顯著，缺乏特效的藥劑和抗性品種，從長(zhǎng)遠(yuǎn)來(lái)看，選育抗病品種才是控制煙草青枯病為害的根本出路。在發(fā)病前快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)田間土壤中R.solanacearum的數(shù)量也是有效預(yù)防青枯病發(fā)生的策略之一。因此，本研究通過(guò)對(duì)煙草青枯病病菌的分子檢測(cè)和品種的抗性鑒定，為青枯病的早期診斷和防治提供理論基礎(chǔ)，對(duì)保障煙草的穩(wěn)產(chǎn)優(yōu)質(zhì)和持續(xù)發(fā)展具有重要意義。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.建立了一套快速、高效的檢測(cè)鑒定煙草青枯病菌的PC

3、R 方法。本研究以采自山東煙區(qū)的煙草青枯病菌為目的菌株，提取基因組DNA，設(shè)計(jì)了一對(duì)特異引物RS-1/RS-2用于R.solanacearum的分子檢測(cè)。利用該引物對(duì)包括R.solanacearum 在內(nèi)的12個(gè)煙草病原菌菌株的基因組DNA 進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，結(jié)果表明：只有R.solanacearum能擴(kuò)增得到290bp的特異性條帶，其它菌株及陰性對(duì)照均無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物。對(duì)煙草組織和土壤的檢測(cè)結(jié)果也表明，該對(duì)引物能特異性地檢測(cè)到R.solan

4、acearum基因組DNA的存在。該引物對(duì)R.solanacearum基因組DNA 檢測(cè)的靈敏度為100fg/μL。
　　 2.分別對(duì)來(lái)自山東蒙陰、沂水、莒縣等地12個(gè)田間土壤樣品進(jìn)行實(shí)際檢測(cè)，結(jié)果與田間發(fā)病情況一致。
　　 3.采用不同的接種濃度和接種苗齡等對(duì)煙草青枯病苗期抗病性進(jìn)行了測(cè)定，篩選出一套適用于煙草苗期的快速準(zhǔn)確的抗病性鑒定方法。煙草青枯病苗期抗病性鑒定，采用1×108 cfu/mL的病原菌懸浮液，在苗齡六

5、周進(jìn)行傷根灌菌液接種，接種后第30天調(diào)查發(fā)病情況，能夠反映不同材料對(duì)青枯病的抗病性差異。
　　 4.對(duì)24個(gè)煙草品種進(jìn)行了青枯病的抗性鑒定，結(jié)果表明，供試品種均未表現(xiàn)免疫反應(yīng)，不同煙草品種的抗病性有一定的差異。品種RG17 抗病性最好，病情指數(shù)為26.11，中抗占20.8％，中感占54.2％，高感占25.0％。5.在24 份煙草材料中選取不同抗性級(jí)別的材料4 份，分別進(jìn)行青枯病病原菌的接種處理，以無(wú)菌水為對(duì)照，測(cè)定接種后植株葉片