擬南芥青枯病抗性基因RRS1的煙草同源性的研究.pdf

1、本研究旨在篩選煙草種質(zhì)抗青枯病基因RRS1。2008年、2009年和2011年開展了選取來自國內(nèi)外81個(gè)煙草品種為材料的大田青枯病病害指數(shù)調(diào)查及RRS1基因9對(duì)SSR特異引物的篩選工作；通過9對(duì)引物及81個(gè)煙草種質(zhì)的篩選，目前已鑒定出引物6F-6R(5'ATGAGAAAGAGGCTCGTCAA3'and5'ACCACAACCCTCAAGCAGTT3')能夠有效地篩選種質(zhì)，共篩選出3個(gè)煙草種質(zhì)(G28，K346，LMAFC34)含有RRS

2、1特異性擴(kuò)增序列；預(yù)期針對(duì)引物(6R-6F)擴(kuò)增的3個(gè)煙草種質(zhì)材料的特異性序列進(jìn)行測序并和RRS1基因的序列進(jìn)行同源性比對(duì)，并對(duì)煙草種質(zhì)資源進(jìn)行同源性評(píng)價(jià)。研究的主要結(jié)果如下：
　　 1、煙草種質(zhì)中至今沒有報(bào)道過可直接利用的抗青枯病基因，擬南芥中克隆的RRS1基因是被發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)青枯病抗性基因，目前只限在擬南芥中研究沒有在其它作物中篩選同類基因，本研究旨在進(jìn)行煙草種質(zhì)抗青枯病基因RRS1的篩選研究，期望在煙草種質(zhì)中尋找出具有類似

3、抗性基因的品種，最終實(shí)現(xiàn)品種改良提高品種抗性。
　　 2、分別于2008年、2009年在安徽省皖南煙區(qū)煙草青枯病病圃，選擇國內(nèi)外文獻(xiàn)中標(biāo)注為抗青枯病的部分煙草種質(zhì)及安徽省尚未鑒定抗性的地方種質(zhì)共138份，田間采用高密度栽培方式、隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，鑒定其青枯病抗性。本試驗(yàn)中沒有免疫煙草種Coker298、K346、NC86、Coker86、K399、LMAFC34、歙圓四號(hào)為高抗品種；G28等13份種質(zhì)為中抗品種；其它種質(zhì)在中感以上。

4、依據(jù)大田病情指數(shù)變化對(duì)煙草種質(zhì)抗性分為四類：感病型、慢病型、抗病型及免疫型，并對(duì)其進(jìn)行數(shù)據(jù)規(guī)范。
　　 3、本研究采用特異引物中在擴(kuò)增80個(gè)煙草種質(zhì)后差異篩選出3份煙草種質(zhì)(G28、K346、LMAFC34)，PCR擴(kuò)增具有與陽性對(duì)照擬南芥同等分子量大小的特異帶型，能夠有效地篩選抗青枯病種質(zhì)。利用PCR特異擴(kuò)增鑒別種質(zhì)不受大田環(huán)境和時(shí)間的限制，可以多重復(fù)驗(yàn)證結(jié)果的可靠性。
　　 4.依據(jù)混合群體分組分析法(BSA)建立抗