枯草芽孢桿菌EB-28防治馬鈴薯晚疫病及其抗菌物質(zhì)研究.pdf

1、由致病疫霉（Phytophthora infestans）引起的馬鈴薯晚疫病，是制約馬鈴薯生產(chǎn)的一種重要病害。本研究發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌EB-28（Bacillus subtilis）具有作為生防菌株防治馬鈴薯晚疫病的潛力。
　　 枯草芽孢桿菌EB-28是由番茄植株中分離得到的對番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）具有抑菌作用的生防菌株。本研究分別測試了其菌懸液、無菌體培養(yǎng)液對馬鈴薯晚疫病菌游動孢子釋放和孢子囊直接萌發(fā)

2、的抑菌能力。結(jié)果顯示，EB-28無菌體培養(yǎng)液對馬鈴薯晚疫病菌的游動孢子釋放有強烈的抑制作用（抑菌率達到91.26％），但對病菌孢子囊萌發(fā)幾乎無抑制作用。
　　 通過在不同培養(yǎng)環(huán)境條件下，分別對EB-28菌株的菌量和其無菌體培養(yǎng)液對馬鈴薯晚疫病菌游動孢子釋放的抑制率進行測定，明確了EB-28菌株的最適培養(yǎng)條件。在黑麥培養(yǎng)基中,30℃、180 rpm、48 h時，其菌量能夠達到最高（108 cfu/mL）水平，同時其無菌體培養(yǎng)液對病

3、菌游動孢子釋放的抑制率也達到最高的90.30％。結(jié)果顯示，最佳培養(yǎng)條件為30℃、pH7、48 h。
　　 試驗分別測試了EB-28菌懸液及無菌體培養(yǎng)液在離體葉片與盆栽馬鈴薯上對馬鈴薯晚疫病的防治效果。結(jié)果顯示，EB-28菌懸液在盆栽植株試驗中對馬鈴薯晚疫病的防效達到74.22％，顯著高于其在離體葉片上的防效55.68％。同時，其無菌體培養(yǎng)液的防效也分別達到了61.80％（盆栽試驗）和60.54％（離體葉片試驗）。
　　

4、以抗生素標記的EB-28菌株回接到盆栽馬鈴薯葉片，測定其在馬鈴薯葉片上的定殖能力。實驗結(jié)果顯示，接種3 d時，EB-28的菌量呈上升趨勢，并在第3 d達到最高（108 cfu/g），15 d后，菌量下降到103 cfu/g水平。同時，EB-28菌株對馬鈴薯晚疫病的防效，也表現(xiàn)出與菌量增減趨勢相同的變化。
　　 EB-28菌株無菌體培養(yǎng)液經(jīng)硫酸銨沉淀收集得到其蛋白粗提液，其中經(jīng)硫酸銨飽和度為30％-80％沉淀所得到的蛋白粗提液對馬

5、鈴薯晚疫病菌游動孢子釋放具有強烈的抑制作用。進一步研究顯示：蛋白粗提液的抑菌活性在40℃條件下處理20 min后與對照相比無顯著變化；經(jīng)60、80、100℃處理后，抑菌活性降低，但經(jīng)100℃處理20 min后，仍保持部分活性。在pH值為5-11范圍內(nèi)時，其抑菌活性略有變化，而當pH為4時，其活性全部喪失。蛋白粗提液經(jīng)胃蛋白酶、胰蛋白酶、蛋白酶k、部分有機溶劑和紫外線分別處理后，活性無顯著變化。經(jīng)SDS-PAGE不連續(xù)體系電泳，結(jié)果顯示這