家兔CD147基因的克隆與原核表達(dá).pdf

1、CD147是免疫球蛋白超家族（IgSF）的一個成員，是一種新發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞表面黏附因子。作為一種跨膜蛋白，CD147廣泛表達(dá)于上皮細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞，參與到許多的生理和病理過程，與腫瘤細(xì)胞的表達(dá)、精子發(fā)育，神經(jīng)系統(tǒng)功能調(diào)節(jié)等密切相關(guān)，特別是在腸道疾病中，CD147促進(jìn)上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生大量的基質(zhì)降解酶，這些基質(zhì)降解酶在腸道炎癥和癌癥中起重要作用。 為了研究CD147在家兔體內(nèi)是否具有同樣的功能，克隆了家兔CD147基因，并得到了相應(yīng)

2、的融合蛋白，試驗(yàn)分兩個部分。 一、家兔CD147基因的克隆、序列分析與結(jié)構(gòu)預(yù)測。利用同源序列克隆原理設(shè)計(jì)一對克隆引物，對家兔十二指腸黏膜組織提取的總RNA進(jìn)行RT-PCR，將PCR產(chǎn)物與pMD19-T載體連接后轉(zhuǎn)化E．coli JM109感受態(tài)細(xì)胞，篩選陽性克隆、測序，并進(jìn)行序列分析與結(jié)構(gòu)預(yù)測；結(jié)果成功克隆了兔CD147基因，并注冊到GenBank（Accession．EU650668），克隆的兔CD147基因包含一個完整的開放

3、閱讀框架，全長為810bp，編碼由270個氨基酸殘基組成的CD147前體蛋白，推導(dǎo)的氨基酸序列信號肽為第1～16個氨基酸。氨基酸序列與牛、人、褐鼠、野豬的同源性分別為62．5％，65．9％，59．5％和66．3％，三級結(jié)構(gòu)預(yù)測表明CD147具有兩個免疫球蛋白類似區(qū)。 二、家兔CD147基因的原核表達(dá)。根據(jù)克隆序列設(shè)計(jì)一對表達(dá)引物，用PCR法從重組克隆載體中擴(kuò)增出含BamHI/HindⅢ酶切位點(diǎn)的CD147片段，雙酶切后亞克隆至p