多頭帶絳蟲(chóng)Tm18基因的克隆與原核表達(dá).pdf

1、腦多頭蚴病又稱腦包蟲(chóng)病，是多頭帶絳蟲(chóng)（Taenia multiceps）的中絳期幼蟲(chóng)(腦多頭蚴Coenurusce cerebralis)寄生于羊和其他有蹄類(lèi)動(dòng)物的的腦、脊髓內(nèi)，引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能障礙的一種人畜共患寄生蟲(chóng)病。該病呈世界性分布，尤其以牧區(qū)較為常見(jiàn)。腦包蟲(chóng)病的藥物療法效果不穩(wěn)定；手術(shù)療法效果雖好，但僅適用于腦表層的包囊。隨著人們對(duì)食品安全的關(guān)注和寄生蟲(chóng)耐藥性的出現(xiàn)，免疫接種重新受到人們的重視。早期進(jìn)行疫苗研究的抗原均為天

2、然抗原，雖然對(duì)腦包蟲(chóng)的免疫預(yù)防有一定的效果；但是由于受抗原來(lái)源的限制，使其很難推廣應(yīng)用。在這種情況下，基因工程疫苗成為一個(gè)不錯(cuò)的選擇。
　　 本研究根據(jù)已知的帶科絳蟲(chóng)的18kDa抗原基因的序列設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物，對(duì)多頭帶絳蟲(chóng)六鉤蚴總RNA進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，得到約552bp的目的片段?；厥漳康钠尾⒖寺〉絇MD18-T載體上，序列測(cè)定結(jié)果顯示本次實(shí)驗(yàn)首次擴(kuò)增出了中國(guó)株多頭帶絳蟲(chóng)的18kDa抗原基因，命名為T(mén)m18。擴(kuò)增的序列中

3、包含完整的開(kāi)放閱讀框，編碼由131個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)。軟件分析表明多頭帶絳蟲(chóng)四川株Tm18與國(guó)外報(bào)道的多頭帶絳蟲(chóng)土耳其株（序列號(hào)為EF672034）同源性為91.26％，氨基酸序列同源性為79.39％。
　　 根據(jù)獲得的基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)表達(dá)引物，構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌BL21(DE3)進(jìn)行原核表達(dá)，同時(shí)對(duì)表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化，確立了pGEX-4T-rTm18表達(dá)的最佳條件為37℃、0.6mmol/LIPTG誘導(dǎo)8h，融合