高效液相色譜法習題答案

1、1第二十章高效液相色譜法思考題和習題1簡述高效液相色譜法和氣相色譜法的主要異同點。相同點：均為高效、高速、高選擇性的色譜方法，兼具分離和分析功能，均可以在線檢測不同點：分析對象及范圍流動相的選擇操作條件GC能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點較低的樣品，占有機物的20%流動相為有限的幾種“惰性”氣體，只起運載作用，對組分作用小加溫常壓操作HPLC溶解后能制成溶液的樣品，高沸點、高分子量、難氣化、離子型的穩(wěn)定或不穩(wěn)定化合物，占有機物的80%流動相為

2、液體或各種液體的混合。它除了起運載作用外，還可通過溶劑來控制和改進分離。室溫、高壓下進行2何謂化學鍵合相？常用的化學鍵合相有哪幾種類型？分別用于哪些液相色譜法中？采用化學反應的方法將固定液鍵合在載體表面上，所形成的填料稱為化學鍵合相。優(yōu)點是使用過程不流失，化學性能穩(wěn)定，熱穩(wěn)定性好，適于作梯度淋洗。目前常用的SiOSiC型鍵合相，按極性分為非極性，中等極性與極性三類。①非極性鍵合相：常見如ODS鍵合相，既有分配又有吸附作用，用途非常廣泛，

3、用于分析非極性或弱極性化合物；②中等圾性鍵合相：常見的有醚基鍵合相，這種鍵合相可作正相或反相色譜的固定相，視流動相的極性而定：③極性鍵合相：常用氨基、氰基鍵合相，用作正相色譜的固定相，氨基鍵合相還是分離糖類最常用的固定相。3什么叫正相色譜？什么叫反相色譜？各適用于分離哪些化合物？正相色譜法：流動相極性小于固定相極性的色譜法。用于分離溶于有機溶劑的極性及中等極性的分子型物質(zhì)，用于含有不同官能團物質(zhì)的分離。反相色譜法：流動相極性大于固定相極

4、性的色譜法。用于分離非極性至中等極性的分子型化合物。4簡述反相鍵合相色譜法的分離機制。典型的反相鍵合色譜法是用非極性固定相和極性流動相組成的色譜體系。固定相，常用十八烷基（ODS或C18）鍵合相；流動相常用甲醇水或乙腈水。非典型反相色譜系統(tǒng)，用弱極性或中等極性的鍵合相和極性大于固定相的流動相組成。反相鍵合相表面具有非極性烷基官能團，及未被取代的硅醇基。硅醇基具有吸附性能，剩余硅醇基的多寡，視覆蓋率而定。對于反相色譜的分離機制目前，保留

5、機制還沒有一致的看法，大致有兩種觀點，一種認為屬于分配色譜，另一種認為屬于吸附色譜。分配色譜的作用機制是假設混合溶劑（水十有機溶劑）中極性弱的有機溶劑吸附于非極性烷基配合基表面，組分分子在流動相中與被非極性烷基配合基所吸附的液相中進行分配。吸附色譜的作用機制可用疏溶劑理論來解釋。這種理論把非極性的烷基鍵合相，看作是在硅膠表面上覆蓋了一層鍵合的十八烷基的“分子毛“，這種“分子毛有強的疏水特性。當用水與有機溶劑所組成的極性溶劑為流動相來分離

6、有機化合物時，一方面，非極性組分分子或組分分子的非極性部分，由于疏溶劑作用，將會從水中被＂擠＂出來，與固定相上的疏水烷基之間產(chǎn)生締合作用，其結果使組分分子在固定相得到保留。另一方面，被分離物的極性部分受到極性流動相的作用，使它離開固定相，減小保留值，此即解締過程，顯然，這兩種作用力之差，決定了分子在色譜中的保留行為。一般說來，固定相上的烷基配合基或被分離分子中非極3(3)流速流速大于0.5cms時，H～u曲線是一段斜率不大的直線。降低流

7、速，柱效提高不是很大。但在實際操作中，流量仍是一個調(diào)整分離度和出峰時間的重要可選擇參數(shù)。9試討論反相HPLC的分離條件的選擇。反相HPLC法是以表面非極性載體為固定相，以比固定相極性強的溶劑為流動相的—種液相色譜分離模式。反相HPLC色譜中樣品的保留值主要由固定相比表面積、鍵合相種類和濃度決定，保留值通常隨鏈長增長或鍵合相的疏水性增強而增。溶質(zhì)保留值與固定相表面積成正比，當其他條件相同時，溶質(zhì)在低表面積色譜柱上的保留值短。樣品的保留值也

8、可以通過改變流動相組成或溶劑強度來調(diào)整，溶劑強度取決于有機溶劑的性質(zhì)和其在流動相中的濃度。10在正、反相HPLC中流動相的強度是否相同？在正相色譜中，由于固定相是極性的，所以溶劑極性越強，洗脫能力也越強，即極性強的溶劑是強溶劑。在反相色譜中，由于固定相是非極性的，所以溶劑的強度隨溶劑的極性降低而增加，即極性弱的溶劑是強溶劑。11什么叫梯度洗脫？它與GC的程序升溫有何異同？在一個分析周期內(nèi)，按一定程序不斷改變流動相的組成或濃度配比，稱為梯

9、度洗提。是改進液相色譜分離的重要手段。梯度洗提與氣相色譜中的程序升溫類似，但是前者連續(xù)改變的是流動相的極性、pH或離子強度，而后者改變的溫度。程序升溫也是改進氣相色譜分離的重要手段。12蒸發(fā)光散射檢測器的原理及特點是什么？蒸發(fā)光散射檢測器（EvapativeLightscatteringDetect）是通用型檢測器，可以檢測沒有紫外吸收的有機物質(zhì)，如人參皂苷、黃芪甲苷等。一、ELSD原理恒定流速的色譜儀（高效液相、逆流色譜、高效毛細管電

10、泳等）洗脫液進入檢測器后，首先被高壓氣流霧化，霧化形成的小液滴進入蒸發(fā)室(漂移管，drifttube)，流動相及低沸點的組分被蒸發(fā)，剩下高沸點組分的小液滴進入散射池，光束穿過散射池時被散射，散射光被光電管接收形成電信號，電信號通過放大電路、模數(shù)轉換電路、計算機成為色譜工作站的數(shù)字信號——色譜圖。二、特點1洗脫液需要霧化，所以霧化氣流的純度和壓力會影響檢測器的信噪比。2流動相要蒸發(fā)掉，所以不能使用不易揮發(fā)的物質(zhì)來調(diào)節(jié)流動相的pH值?？梢酝?/p>

11、過蒸發(fā)溫度的調(diào)節(jié)來使比被測物質(zhì)沸點低的組分蒸發(fā)。在不使被測物質(zhì)蒸發(fā)的前提下，溫度越高，流動相蒸發(fā)越完全，色譜圖基線越好、信噪比越高。如果被測物質(zhì)沸點接近或低于流動相的蒸發(fā)溫度，則無法檢測；不過，100%的水做流動相，蒸發(fā)室溫度也才設為150攝氏度，沸點比水低的有機物質(zhì)完全可以用氣相色譜儀進行分離檢測了。由于流動相和溶劑蒸發(fā)了，使用ELSD檢測器收集的色譜圖一般沒有溶劑峰；而且梯度洗脫沒有折光視差效應，一般不會出現(xiàn)基線漂移。3.檢測光散射