實驗十六、丙二酸對琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制作用

1、實驗十六實驗十六:丙二酸對琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制作用丙二酸對琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制作用【實驗名稱】：【實驗名稱】：丙二酸對琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制作用丙二酸對琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制作用09救援一班第三大組李嵐宇2009222336室溫：25℃（一）實驗?zāi)康模海ㄒ唬嶒災(zāi)康模?、學(xué)習(xí)和掌握競爭性抑制作用的特點。2、觀察丙二酸對琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制作用。（二）實驗原理：（二）實驗原理：化學(xué)結(jié)構(gòu)與酶作用的底物結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)，可與底物

2、競爭結(jié)合酶的活性中心，使酶的活性降低甚至喪失，這種抑制作用稱為競爭性抑制作用。琥珀酸脫氫酶是機體內(nèi)參與三羧酸循環(huán)的一種重要的脫氫酶，其輔基為FAD，如心肌中的琥珀酸脫氫酶在缺氧的情況下，可使琥珀酸脫氫生成延胡索酸，脫下之氫可將藍色的甲烯藍還原成無色的甲烯白。這樣，便可以顯示琥珀酸脫氫酶的作用。丙二酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)與琥珀酸相似，它能與琥珀酸競爭而和琥珀酸脫氫酶結(jié)合。若琥珀酸脫氫酶已與丙二酸結(jié)合，則不能再催化琥珀酸脫氫，這種現(xiàn)象稱為競爭性抑制。

3、如相對地增加琥珀酸的濃度，則可減輕丙二酸的抑制作用。（三）實驗材料與儀器（三）實驗材料與儀器：1器材大白鼠、手術(shù)剪、鑷子、磁盤、勻漿器、量筒、燒杯、紗布、濾紙、試管及試管架、恒溫水箱、電熱水浴鍋2試劑0.2molL琥珀酸溶液、0.02molL琥珀酸溶液、0.2molL丙二酸溶液、0.02molL丙二酸溶液、115molL磷酸緩沖液、0.02％甲烯藍、液體石蠟。（四）實驗步驟（四）實驗步驟:1、酶提取液的制備：去大白鼠的肝臟、心臟、腎臟，

4、用冷水洗3次，加入115molL磷酸緩沖液pH在7.4。在勻漿器中進行勻漿，然后用紗布過濾，用干凈的燒杯收集過濾的備用。2、取試管6支，編號，在按圖步驟操作，酶提取液（ml）磷酸緩沖液（ml）0.2molL琥珀酸（滴）0.02molL琥珀酸（滴）0.2molL丙二酸溶液（滴）0.02molL丙二酸溶液（滴）蒸餾水（滴）甲烯藍（滴）褪色時間（分鐘）試管128833分33秒試管228835分30秒試管328836分04秒試管428837分2

5、8秒試管52883無限大試管62883無限大試管6，在酶提取液先在100℃的水浴加熱煮沸5min。各管溶液立即混均勻，沿試管壁加入液體石蠟，約0.5cm，各管置于37℃的水浴中保溫，切勿搖動試管，隨時觀察比較各試管顏色的變化，記錄褪色時間。（五）（五）實驗結(jié)果記錄：實驗結(jié)果記錄：表1（六）（六）實驗討論：實驗討論：1、酶提取液中有琥珀酸脫氫酶活性，表1所示，在試管1中沒有抑制劑，但琥珀酸依然能脫氫，使得甲烯藍反應(yīng)得甲烯白。2、各管的褪色

6、有明顯的時間差別，褪色時間隨[I][S]逐漸增大，而增大。3、丙二酸對琥珀酸脫氫酶抑制作用的類型是競爭性抑制，其特點：最大反應(yīng)速率Vmax不變，米氏常數(shù)Km增大，競爭性抑制可以通過增大底物濃度來減輕抑制程度。4、本實驗中5號、6號試管的作用是做對照，5號試管和1號試管做對照，說明酶提取液中有琥珀酸脫氫酶的存在，6號試管中的酶提取液在100℃的水浴加熱煮沸過，所以琥珀酸脫氫酶是失活的?！咀⒁馐马棥俊咀⒁馐马棥浚?、酶提取液的制備應(yīng)操作迅速

7、，以防止酶活性降低。2、加入液體石蠟的作用是隔絕空氣，以避免空氣中的氧氣對實驗造成影響，因此加石蠟時試管壁要傾斜，注意不要產(chǎn)生氣泡。3、37℃水浴保溫過程中，不能搖動試管，避免空氣中的氧氣接觸反應(yīng)溶液，使得還原型的甲烯白重新氧化成藍色。4.、37℃水浴保溫過程中，要注意隨時觀察各試管的褪色情況。5、實驗結(jié)果結(jié)束后，一定要洗干凈試管內(nèi)的液體石蠟。2010年10月9號褪色時間（分鐘）[I][S]試管13分33秒0試管25分30秒0.1試管3