扁桃酸消旋酶和扁桃酸脫氫酶基因的克隆及表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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1、苯乙酮酸（PGA），又稱苯甲酰甲酸（BFA），是應(yīng)用廣泛的有機(jī)合成中間體?？梢杂脕?lái)合成多種醫(yī)藥和農(nóng)藥。通過(guò)與金屬元素絡(luò)合，又發(fā)現(xiàn)它可作為熒光材料的敏化劑和有機(jī)氧化反應(yīng)的催化劑，更加引起人們的重視。 扁桃酸消旋酶（MR）和扁桃酸脫氫酶（MDH）是微生物體內(nèi)代謝扁桃酸生成苯乙酮酸的兩個(gè)關(guān)鍵酶。根據(jù)研究結(jié)果，以扁桃酸為唯一碳源篩選得到具有高效轉(zhuǎn)化扁桃酸活性的菌株，對(duì)其中活性較高的62號(hào)菌進(jìn)行了菌種生理生化及16S rDNA的鑒定工作

2、，證明是銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。實(shí)驗(yàn)表明62號(hào)菌能同時(shí)轉(zhuǎn)化R-及S-扁桃酸，是一株可作為克隆扁桃酸消旋酶基因（mdlA）和扁桃酸脫氫酶基因（mdlB）的理想菌株。 以62號(hào)菌染色體DNA為模板，PCR擴(kuò)增獲得mdlA+mdlB基因全長(zhǎng)；PCR產(chǎn)物經(jīng)純化后與T載體相連，構(gòu)建克隆載體pT-mdlA+mdlB：pT-mdlA+mdlB經(jīng)NdeⅠ/NotⅠ雙酶切后將目的基因插入pET30a（+）載

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