用于研究cxcr4和survivin啟動子活性的重組腺病毒構建及其在乳腺癌細胞系的轉錄靶向性評價39;

1、天津醫(yī)科大學博士學位論文用于研究CXCR4和Survivin啟動子活性的重組腺病毒構建及其在乳腺癌細胞系的轉錄靶向性評價姓名：李曉霞申請學位級別：博士專業(yè)：免疫學指導教師：姚智;王寶利20070601天津醫(yī)科大學博士學位論文—摘要化因子受體C X C R 4 是一個具有3 5 2 個氨基酸且高度保守的與G 蛋白偶聯(lián)的七次跨膜受體，目前已報道至少2 3 種不同的惡性腫瘤細胞表達C X C R 4 。M u l l e r 等報道乳腺癌細胞

2、系和乳腺癌組織均高度表達C X C R 4 ，同時證實C X C R 4 與其配體C X C L l 2 ( S D F ·1 ) 共同作用的生物軸在腫瘤轉移過程中發(fā)揮重要作用。而S u r v i v i n是近年發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋( i n h i b i t o r o f a p o p t o s i sp r o t e i n s ，l A P ) 家族的新成員，由1 4 2 個氨基酸組成，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最強的凋

3、亡抑制因子，組織分布特征具有明顯的細胞選擇性，僅在胚胎細胞和多種腫瘤細胞中表達特別是乳腺癌、胰腺癌、食管癌、原發(fā)性惡性膠質瘤及卵巢癌，而在成人正常組織中不表達。目前，已有研究證實C X C R 4 啟動子在腎癌和黑色素瘤中呈現(xiàn)腫瘤特異性，而S u r v i v i n 也作為T S P 在神經膠質瘤、肝癌和胃癌中表現(xiàn)了良好的應用前景。因此，本文的研究重點即評價并比較重組腺病毒系統(tǒng)中C X C R 4 和S u r v i v i n

4、啟動子在乳腺癌細胞系的轉錄靶向性，具有重要的實際意義和臨床價值。首先，我們通過熒光定量P C R 法檢測不同生物學性狀的乳腺細胞系中C X C R 4 和S u r v i v i n 的m R N A 水平的表達，結果表明，相對于乳腺上皮H B L l 0 0細胞，C X C R 4 和S u r v i v i n 基因在乳腺癌細胞系均為高度表達( PM C F 7 > T - 4 7 D M D A ．M B - 4 3 5

5、 > H B L l o o ，其中高轉移性細胞系M D A - 咖B ．2 3 1 的表達水平較其它細胞顯著升高( P0 ．0 5 ) 。S u r v i v i n 在各細胞的m R N A 表達水平依次為：T 4 7 D > M D A - M B - 4 3 5 > M C F 7 > M D A - M B - 2 3 1 > H B L l 0 0 。在乳腺癌細胞M C F 7 和M D A

6、- M B - 4 3 5 之間無明顯差異( P > O ．0 5 ) 。其中腺癌M C F 7 和導管癌M D A - M B - 4 3 5 之間無明顯差異( P > O ．0 5 ) ，但導管癌T 4 7 D 和M D A - M B - 4 3 5 之間，腺癌M C F 7 和M D A ．M B 一2 3 1 之間卻有明顯差異( P < O ．0 5 ) 。因此得出結論，C ×c R 4 與乳腺癌的

7、轉移密切相關，而S u r v i v i n 是一個獨立于乳腺癌病理類型的指標，二者在乳腺癌細胞系的高度表達，提示二者作為腫瘤治療靶點的可能性。繼而，采用套式P C R 方法擴增C X C R 4 和S u r v i v i n 啟動子，將其分別克隆到含有報告基因增強綠色熒光蛋白( E G F P ) 的質粒載體p E G F P ．1 和含有熒光素酶( L u e i f e r a s e ) 的質粒載體p G L 3 一B a