DHA對(duì)乳腺癌細(xì)胞系的化療增敏性研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察DHA與5-FU聯(lián)合作用對(duì)乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231增殖與凋亡的影響，研究DHA對(duì)細(xì)胞Wnt/β-catenin信號(hào)傳導(dǎo)通路的作用，探討DHA抑制乳腺癌的可能分子機(jī)制，為臨床上應(yīng)用此藥物輔助治療乳腺癌提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：以MDA-MB-231細(xì)胞系為研究對(duì)象，采用MTT法測(cè)定不同濃度DHA（10、20、30、40、50μg/ml）對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞增殖的影響，5-FU（50μg/ml）單用及

2、與不同濃度DHA（20、40μg/ml）合用對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞的毒性作用；流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡；RT-PCR從 mRNA水平檢測(cè) DHA對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞β-catenin、GSK-3β基因表達(dá)的影響；Western blot從蛋白水平分析DHA對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β（Ser9）蛋白表達(dá)的影響；免疫細(xì)胞化學(xué)法觀察DHA單獨(dú)及與GSK-3β抑制劑（LiCl，2

3、0 mmol/l）聯(lián)合作用對(duì)細(xì)胞中β-catenin蛋白定位的影響。
　　結(jié)果：一定濃度的DHA（10、20、30、40、50μg/ml）對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，而且隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)抑制率增加（p<0.05）。20μg/ml、40μg/ml的DHA分別與5-FU聯(lián)合作用后對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞的增殖抑制率較5-FU單藥組增加（p<0.05），隨著聯(lián)合作用時(shí)間的延長(zhǎng)抑制率增加（p<0.05）。D

4、HA（20μg/ml）、5-FU單獨(dú)作用MDA-MB-231細(xì)胞48h后，細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期（63.71±0.82％、73.36±0.71%），誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡（4.66±0.44%、6.99±0.10%），聯(lián)合用藥時(shí)對(duì)G0/G1期阻滯作用更明顯（77.08±0.71%），細(xì)胞凋亡率增加（8.22±.0.15%）（p<0.05）。DHA作用于MDA-MB-231細(xì)胞48h后，β-catenin基因及蛋白表達(dá)下調(diào)（p<0.05），對(duì)G