腺病毒ad.rms靶向治療胰腺癌的研究

1、福建農(nóng)林大學碩士學位論文腺病毒Ad.rms靶向治療胰腺癌的研究姓名：樂黃鶯申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導(dǎo)教師：關(guān)雄;秦仁義20050401液達增強，可達正常時的l O 倍以上?；谶@些發(fā)現(xiàn)，我們構(gòu)建了腺病毒A d H l - K - r a s 州”、A d M U C l 一h S S T R 2 和A d 。蕊s ，努剮溺這三釋瘸毒戇染P a n e - 1 緇魏：并深入話髯它{ | 、】囂菰癌效應(yīng)。我們采用n e

2、 s t P C R 技術(shù)，擴增得到7 8 6 b p 的M U C l 啟動子，以綠色熒光蛋囪( E G F P ) 作為報告基因，邋過熒光顯微鏡和流式細胞儀檢測E G F P 儀在P a n e 一1審表達，表翻該痘動予霹P a n e —t 細蕤麓特異往。穗纛，將該鑫動予幫h S S T R 2基因克隆到p A d T r a c k 質(zhì)粒，與腺病毒骨架質(zhì)粒p A d E a s y ～1 共轉(zhuǎn)染2 9 3 細胞，得到腺病毒A d

3、 M U C l ．h S S T R 2 。病毒分別感染胰腺癌P a n e —l 細胞和正常胰腺P N P C綏軀、富強潦H e L a 綏巍囂，R T - P C R 窩w e s t e r n 露跡努凝發(fā)瑗，h S S T R 2 蒸霆在。M U C l 啟動予的調(diào)控下，程P a n e ．1 細胞中表達量顯著增加，在P N P C 細胞中沒有變化，在H e L a 沒有表達，而且它還抑制了該細胞的增殖，引起C D K 抑制物

4、瓣{ 稻p 2 7 蛋稻襲這量贅上瀵。我們還設(shè)計了一段以P a n c ．1 細胞中突變的K - r a s * 州2 m R N A 為靶分子的6 3 b p澈鏈R N A ，漣問H I —R N A 啟動子通過藏克隆連接到p A d T r a c k 成粒中形成p A d T r a e k H l 。K - l ' a S v 搬2 ，勞鏹裝藏癱毒。實驗績暴表明，本磺究設(shè)計鶼A d H l ．K - r a s * 州2

5、 不僅能產(chǎn)生針對K - m s * “1 2 的小干擾R N A ( s i R N A ) ，特彈地引起基闌K - m s v “”的沉默，而且述使胰腺癌的激型發(fā)生逆轉(zhuǎn)。同時，流式細胞儀檢測A d H I ．K - r a s 讕弳感染P a n e —l 綴藏雩l 起戇溺之夔顯魄鬃懿綏麓鞠之搴麓，蠢瑟這～結(jié)果為研究利用R N A 干擾進行胰腺瘸旗因治療做了初步探索。為了探討雙基因治療怒否比上述的單基因治療效果更好，我們構(gòu)建了一種掰豹

6、驤癌毒載髂A d 。r i l l s ，- g 糍霾囂表達鋒慰K - m s * 搬2 瓣s i R N A 裁焱M U C I 癌渤子調(diào)控下表達h S S T R 2 疆白。M T T 法和流式細胞儀檢測顯示A d ．r i l l s 比A d M U C I —h S S T R 2 、A d H l 一K - r a s V a l ”有更好的抗胰腺瘸繃胞效應(yīng)。同時，基于3耱病毒體努霹P a n e 一1 蘩穩(wěn)豹殺痿效鑫實驗，