毛細(xì)管電泳——質(zhì)譜聯(lián)用和樣品富集新技術(shù)的研究及其在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的應(yīng)用.pdf

1、為了解決蛋白質(zhì)組學(xué)研究中存在的分離與檢測困難,本文開展了一些研究并取得進(jìn)展,研究主要集中在以下幾個方面.發(fā)展了適合電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)檢測的毛細(xì)管電泳(CE)動態(tài)涂層方法,以提高蛋白酶解肽的分離與鑒定.利用羥丙基纖維素溶液動態(tài)涂層的技術(shù),修飾毛細(xì)管管壁,改善CE分離效率.在不影響質(zhì)譜檢測的條件下,動態(tài)涂層毛細(xì)管電泳與質(zhì)譜檢測聯(lián)用有效地提高了對蛋白質(zhì)的鑒定能力,應(yīng)用該技術(shù)對復(fù)雜蛋白質(zhì)樣品的酶解產(chǎn)物進(jìn)行了分析鑒定,取得了較為滿意的結(jié)果

2、.胰蛋白酶固定石英毛細(xì)管酶解-CE或基質(zhì)輔助激光解吸—飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF/MS)的研究:肽譜分析是進(jìn)行蛋白質(zhì)鑒定和獲得蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)信息的有力工具.本文制作了胰蛋白酶固定的石英毛細(xì)管用于快速的的蛋白酶解和肽譜分析.建立了一種基于溶膠—凝膠包埋聚氯化丙基銨(PDDA)和靜電吸附原理的石英毛細(xì)管表面固定化酶的方法,該固定化酶方法具有固定條件溫和、酶表觀活性高,可反復(fù)再生等優(yōu)點(diǎn).低豐度蛋白的分析與鑒定是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的重點(diǎn)和難點(diǎn),其

3、中低豐度樣品的富集提高檢測水平的關(guān)鍵步驟.為此,我們首次開發(fā)了以納米沸石為吸附載體的樣品富集-MALDI-TOF/MS分析方法.利用納米沸石比表面積大,表面硅羥基豐富,具有良好的離子交換性能和豐富可調(diào)的表面性質(zhì)的特點(diǎn),對極性化合物如多肽、蛋白質(zhì)進(jìn)行濃縮和測定.樣品被沸石吸附后無需洗脫,直接與有機(jī)基質(zhì)混合進(jìn)行MALDI/MS分析.我們仔細(xì)研究了納米沸石的吸附機(jī)制、不同沸石材料對吸附性能和對MALDI效率的影響,從中篩選了兩種富集效率高、對