HO-CO系統(tǒng)和NOS-NO系統(tǒng)在RE患者食管粘膜中的表達(dá).pdf

1、目的：反流性食管炎(RE)是一種常見(jiàn)的消化系統(tǒng)的疾病，其病因尚未完全明了，最新的研究顯示一些氣體信使分子可能與RE的發(fā)病機(jī)制有關(guān)，本研究測(cè)定了RE患者食管下括約肌的靜息壓力、血漿一氧化氮(NO)和一氧化碳(CO)濃度、HO/CO系統(tǒng)和NOS/NO系統(tǒng)在RE患者食管粘膜中的表達(dá)，旨在研究它們之間的關(guān)系，為探討RE的發(fā)病機(jī)制做出一些嘗試。 方法： (1)RE的診斷按照洛杉磯分類標(biāo)準(zhǔn)(世界胃腸病學(xué)大會(huì)，1994年)：共分4級(jí)：A級(jí)：粘

2、膜破損局限于粘膜皺襞上，且長(zhǎng)度<5mm；B級(jí)：粘膜破損局限于粘膜皺襞上，其中至少一個(gè)粘膜破損長(zhǎng)度>5mm；C級(jí)：粘膜破損相互融合，但小于食管周徑75％；D級(jí)：粘膜破損相互融合，至少侵犯食管周徑75％以上，食管下端潰瘍也列入D級(jí)。從行胃鏡檢查的病例中選擇了77例RE患者及20例對(duì)照組。(2)應(yīng)用高分辨臺(tái)式灌注導(dǎo)管測(cè)壓儀測(cè)定了各組RE患者和對(duì)照組食管下括約肌的靜息壓壓力。(3)采用硝酸還原酶法測(cè)定各組RE患者和對(duì)照組血漿中NO的濃度。(4)

3、采用比色法測(cè)定各組RE患者和對(duì)照組血漿中CO的濃度。(5)采用免疫組織化學(xué)(SP)染色法觀察血紅素氧合酶-1(HO-1)、血紅素氧合酶-2(HO-2)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)、神經(jīng)元型一氧化氮合酶(nNOS)在RE患者及對(duì)照組的食管粘膜中的定位；并用圖像分析技術(shù)半定量監(jiān)測(cè)其蛋白的表達(dá)的強(qiáng)弱，用平均光密度值表示強(qiáng)弱。(6)采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理，計(jì)量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)來(lái)表示，計(jì)數(shù)資料采用x<'2>檢驗(yàn)，各

4、組均數(shù)的比較用單因素方差分析，兩兩之間均數(shù)比較用LSD-t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，對(duì)iNOS和HO-1表達(dá)水平采用相關(guān)性分析，若P<0.05表明兩者具有相關(guān)性。 結(jié)果：(1)食管下括約肌靜息壓力(mmHg)的測(cè)定：RE各組和對(duì)照組分別為：A級(jí)組：10.77±2.53；B級(jí)組：9.60±1.95；C級(jí)組：6.98±1.77；D級(jí)組：5.60±1.51；對(duì)照組：17.88±8.33。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示：A、B組之間和C、D

5、組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，其它各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。(2)NOS/NO系統(tǒng)的測(cè)定：①血漿一氧化氮(μmol/L)濃度的測(cè)定值分別為：A級(jí)組：58.22±21.69；B級(jí)組：62.40±24.07；C級(jí)組：73.74±37.30；D級(jí)組：94.51±36.19；對(duì)照組：49.24±18.57。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示：除A級(jí)組與B級(jí)組、A級(jí)組與C級(jí)組、A級(jí)組與對(duì)照組、B級(jí)組與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0

6、.05)，其它各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。②免疫組化染色結(jié)果顯示：iNOS蛋白主要在RE患者食管粘膜上皮細(xì)胞中表達(dá)，胞質(zhì)呈黃色至棕黃顆粒，iNOS在細(xì)胞核中也有少量表達(dá)。對(duì)照組，大多樣本沒(méi)有iNOS陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)，少數(shù)樣本在食管粘膜上皮細(xì)胞中表達(dá)，胞質(zhì)呈淺黃色；nNOS蛋白主要在食管粘膜上皮細(xì)胞中表達(dá)，胞質(zhì)呈黃色至棕黃顆粒。對(duì)照組，大多樣本沒(méi)有nNOS陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)，少數(shù)樣本在食管粘膜上皮細(xì)胞中表達(dá)，胞質(zhì)呈淺黃色。③平均

7、光密度值：iNOS平均光密度值分別為：A級(jí)組：0.212±0.021；B級(jí)組：0.212±0.023；C級(jí)組：0.285±0.022；D級(jí)組：0.333±0.029；對(duì)照組：0.162±0.017。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示：除A級(jí)組與B級(jí)組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，其它各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；nNOS平均光密度值分別為：A級(jí)組：0.200±0.028；B級(jí)組0.205±0.036；C級(jí)組：0.214±0.039；D

8、級(jí)組：0.217±0.063；對(duì)照組：0.175±0.013。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示：A、B、C、D組之間的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(3)HO/CO系統(tǒng)的測(cè)定：①血漿一氧化碳濃度(μmol/L)的測(cè)定：A級(jí)組：0.787±0.262； B級(jí)組：0.879±0.261；C級(jí)組：0.759±0.204；D級(jí)組：0.810±0.287：對(duì)照組：0.858±0.235。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示：RE

9、各組與對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。②免疫組化染色結(jié)果顯示： HO-1蛋白主要在RE組食管粘膜上皮細(xì)胞中表達(dá)，胞質(zhì)呈黃色至棕黃顆粒。對(duì)照組，大多樣本沒(méi)有HO-1陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)，少數(shù)樣本在食管粘膜上皮細(xì)胞中表達(dá)，胞質(zhì)呈淺黃色；HO-2蛋白在RE患者和對(duì)照組食管粘膜上皮細(xì)胞中均有表達(dá)，胞質(zhì)呈黃色至棕黃顆粒。③平均光密度值：HO-1平均光密度分別為：A級(jí)組：0.209±0.031；B級(jí)組：0.210±0.032；C級(jí)組：0.2

10、38±0.032；D級(jí)組：0.312±0.050；對(duì)照組：0.176±0.016。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示：除A級(jí)組與B級(jí)組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，其它各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)：HO-2平均光密度分別為：A級(jí)組：0.243±0.053；B級(jí)組：0.218±0.043；C級(jí)組：0.225±0.042；D級(jí)組：0.217±0.041；對(duì)照組：0.218±0.037。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示：A組、B組、C組、D組之間的比較差異無(wú)

11、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，且與對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(4)NOS/NO系統(tǒng)與HO/CO系統(tǒng)之間的關(guān)系：RE患者HO-1和iNOS的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.513，P=0.000)；而對(duì)照組HO-1和iNOS的表達(dá)無(wú)相關(guān)性(r=0.073，P=0.758)。 結(jié)論：1．RE各組食管下括約肌靜息壓均低于對(duì)照組，提示RE患者可能存在食管下括約肌靜息壓的降低。2．隨著反流性食管炎程度的加重，RE患者血漿NO濃度有

12、逐漸增高的趨勢(shì)，提示NO介導(dǎo)了LES運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)并參與了RE的致病過(guò)程；iNOS蛋白主要在RE患者食管粘膜上皮細(xì)胞中表達(dá)，在細(xì)胞核中也有少量表達(dá)；對(duì)照組則極少見(jiàn)iNOS陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)。RE患者iNOS表達(dá)較對(duì)照組增強(qiáng)，同時(shí)隨著食管病變程度的加重而進(jìn)行性增強(qiáng)，提示iNOS的高表達(dá)可能是導(dǎo)致食管粘膜損傷的重要因素：nNOS蛋白主要RE患者食管粘膜上皮細(xì)胞中表達(dá)，而對(duì)照組則極少見(jiàn)nNOS陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)。這提示RE患者食管nNOS的分布和表達(dá)異?？?/p>

13、能引起食管組織內(nèi)、細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞間NO分布及量的改變，從而導(dǎo)致食管粘膜的損傷。3．RE各組血漿一氧化碳濃度與對(duì)照組無(wú)差異，考慮與測(cè)定血漿中一氧化碳的影響因素較多有關(guān)；HO-1蛋白主要在RE組食管粘膜上皮細(xì)胞中表達(dá)，而對(duì)照組則極少見(jiàn)HO-1陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)，隨著反流性食管炎的程度的加重，HO-1陽(yáng)性細(xì)胞及其蛋白的表達(dá)也一致性地增強(qiáng)，從而發(fā)揮自身保護(hù)效應(yīng)，推測(cè)HO-1在食管損傷發(fā)生時(shí)作為一種代償性機(jī)制具有一定保護(hù)作用；HO-2蛋白在RE組和對(duì)照