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文檔簡介
1、該研究對粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe)中一個新的snoRNA--mgU2-3/11 snoRNA(methylation guidefor U2snRNA U3and U11)進行了鑒定,并對其指導U2 snRNA2'-O-核糖甲基化修飾的功能進行了證明.為U2 snRNA的2'-O-核糖甲基化修飾可由snoRNA指導的觀點提供了酵母遺傳學上的證據.為粟酒裂殖酵母中U2 snRNA的核糖甲基化修飾機制及
2、其生物學意義的進一步闡明提供了重要基礎.主要結果如下:1.通過計算機搜索并結合Northern雜交和逆轉錄實驗分析,在粟酒裂殖酵母中發(fā)現并鑒定了一個新的snoRNA--mgU2-3/11 snoRNA.它在細胞中穩(wěn)定存在,大小為161nt,包含box C/D、box C'/D'結構元件以及長4nt的末端反向重復序列,在其box D'和box D上游分別存在兩段長14nt和10nt的與U2 snRNA前體互補的反義序列,理論推測它具有指導
3、U2 snRNA中U3和U11兩個位點2'-O-核糖甲基化的功能.這是首次在酵母中發(fā)現具有指導U2 snRNA 2'-O-核糖甲基化修飾的snoRNA,為酵母中指導snRNA核糖甲基化修飾的box C/D類snoRNA增加了新成員,為snoRNA進一步的功能研究及U2 snRNA核糖甲基化修飾機制的研究提供了良好的遺傳分析體系.2.利用同源重組技術,成功構建了粟酒裂殖酵母mgU2-3/11 snoRNA基因缺失株.并用低濃度dNTP引物
4、延伸法證明了粟酒裂殖酵母mgU2-3/11 snoRNA指導U2 snRNA中Um3和Um11兩個位點2'-O-核糖甲基化修飾的形成.這是世界上首次用酵母遺傳缺失的方法證明了box C/D snoRNA具有指導U2 snRNA 2'-O-核糖甲基化修飾的功能,而mgU2-3/11 snoRNA還是已知的同時指導U2 snRNA中兩個位點2'-O-核糖甲基化修飾的第一個box C/D snoRNA分子.3.采用低濃度dNTP引物延伸法,發(fā)
5、現和鑒定了粟酒裂殖酵母U2 snRNA中的一個2'-O-核糖甲基化修飾新位點--Um3.同時指出粟酒裂殖酵母U2 snRNA中U9位的2'-O-核糖甲基化修飾并不存在.4.通過對粟酒裂殖酵母mgU2-3/11 snoRNA基因缺失株及野生株的溫度轉換生理實驗分析,發(fā)現mgU2-3/11 snoRNA分子的缺失,雖然導致粟酒裂殖酵母U2snRNA中Um3及Um11的缺失,但卻對細胞中U2 snRNA的穩(wěn)定表達與代謝無明顯影響,對粟酒裂殖酵
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