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文檔簡(jiǎn)介
1、目的探討胰腺癌組織E-cad和TIMP-3兩種腫瘤抑制基因的5'-CpG島甲基化情況;以及E-cad基因甲基化與蛋白表達(dá)之間的關(guān)系.以期對(duì)胰腺癌浸潤和轉(zhuǎn)移機(jī)制作初步探索和DNA異常甲基化在臨床早期診斷、治療中的應(yīng)用.方法我們收集了胰十二指腸切除術(shù)的27例胰腺癌組織和6例癌旁正常胰腺組織、5例胰腺良性腫塊.應(yīng)用甲基化特異性PCR檢測(cè)E-cad和TIMP-3兩種腫瘤抑制基因5'-CpG島甲基化情況;應(yīng)用免疫組化(S-P法)檢測(cè)E-cad蛋白
2、表達(dá).檢驗(yàn)DNA甲基化與蛋白表達(dá)及臨床、病理因素之間的關(guān)系.分析TIMP-3基因和E-cad基因異常甲基化的相關(guān)性.結(jié)論(1)、胰腺癌E-cad和TIMP-3基因CpG島異常甲基化是一種普遍現(xiàn)象,兩者發(fā)生甲基化有明顯的相關(guān)性.DNA甲基化陽性是胰腺癌區(qū)別于其它胰腺良性組織的生物學(xué)標(biāo)志之一.(2)、E-cad基因啟動(dòng)子異常甲基化是導(dǎo)致蛋白表達(dá)失活的主要原因之一,但并不是唯一的原因,可能還存在著其它機(jī)制.5-Azacytidine誘導(dǎo)腫瘤細(xì)
3、胞E-cad的表達(dá)和對(duì)侵襲抑制作用的研究目的DNA甲基化作為腫瘤細(xì)胞的一種廣泛的表遺傳調(diào)控方式,在去甲基化治療恢復(fù)抑癌基因DNA非甲基化狀態(tài)后是否會(huì)誘導(dǎo)基因重新表達(dá)?同時(shí),去甲基化后是否能降低腫瘤細(xì)胞的粘附性和侵襲能力?我們用去甲基化藥物5-氮雜胞苷(5-Aza-cytidine)探討其對(duì)乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-435和胰腺癌細(xì)胞株BxPc-3抑癌基因E-cadherin(上皮鈣粘附素)表達(dá)的影響,檢測(cè)其對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長抑制和降低腫瘤
4、細(xì)胞對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的粘附性和侵襲力.方法應(yīng)用甲基化特異性PCR檢測(cè)兩種細(xì)胞株在用去甲基化藥物治療前、后E-cad基因5'-CpG島甲基化情況;用免疫組化(S-P法)檢測(cè)E-cad蛋白重新表達(dá);半定量RT-PCR了解E-cad的mRNA改變;MTT比色法了解細(xì)胞的生長抑制情況;用Transwell體外侵襲實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)該藥抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲性和降低腫瘤細(xì)胞對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的粘附性.結(jié)論去甲基化藥物能有效地逆轉(zhuǎn)乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-435的E-c
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